NBPF15 N端引起蛋白产生多种聚集体并介导相变及DDX43的体外酶学性质研究

目录

声明

第一章文献综述

1.1.1Olduvai结构域与NBPF基因

1.1.2Olduvai结构域在人类基因组上的拷贝数分析及特点

1.1.3Olduvai结构域与疾病

1.1.4Olduvai与其他基因的联系

1.1.5NBPF基因

1.1.6神经退行性疾病与相变

1.1.7相变与疾病、衰老及病理学研究

1.2DDX43的研究历史与进展

1.2.1DEAD-boxRNA解旋酶

1.2.2解旋酶DDX43

1.3本文的研究目的与意义

第二章NBPF15实验设备、材料及方法

2.2.2溶液配制

2.3.3蛋白的大样表达纯化

2.3.4蛋白二三级结构预测

2.3.6蛋白均一性测定

2.3.7小角衍射(SAXS)和圆二色谱(CD)实验

2.3.8透射电子显微镜和微分差干涉显微镜观察

2.3.9单蛋白的结晶筛选

第三章NBPF15结果与分析

3.1.1NBPF15全长及截短蛋白的表达

3.1.2NBPF15截短蛋白的纯化

3.2NBPF15截短蛋白聚集性质的分析

3.2.1第一类蛋白拥有多种聚集状态

3.2.2第二类蛋白拥有两种或者三种聚集状态．

3.2.3第三类蛋白拥有单一聚集状态

3.3含有N端的NBPF15蛋白的基本生化性质

3.3.1SEC-SAXS研究NBPF15蛋白

3.3.2CD研究NBPF15蛋白

3.3.3TEM观察不同的NBPF15截短蛋白

3.3.4使用在线软件预测NBPF15蛋白的有序性

3.4NBPF15N端蛋白的相变

3.5小结

第四章DDX43实验材料和方法

4.1.2DDX43截短及中间引入3C酶切位点的质粒构建

4.2pET-15b-Sumo-DDX43的蛋白纯化

4.3基于荧光各向异性值的蛋白与底物结合实验

4.4DDX43及其截短蛋白解旋活力的测定

4.5DDX43的蛋白酶消化实验

4.6DDX43及其截短蛋白结晶底物与条件的筛选

第五章DDX43结果与分析

5.2DDX43全长蛋白与底物亲和力的测定

5.3DDX43截短蛋白与底物亲和力的测定

5.3.1酶标仪检测DDX43截短蛋白与底物的亲和力

5.3.2DDX43结合底物的主要结构域

5.4DDX43的解旋活性

5.5DDX43蛋白酶消化实验

5.6DDX43的结晶筛选

5.7小结

第六章讨论与展望

6.1NBPF15实验的讨论与展望

6.2DDX43实验的讨论与展望

参考文献

主要符号对照表

附录

致谢

个人简历