耐热碱性蛋白酶产生菌株的分离鉴定及酶学性质研究

摘要

在河南商丘的盐碱地堆肥土壤样中分离到一株耐热的产碱性蛋白酶菌株SR-15，经鉴定为枯草芽孢杆菌(BacillusSubtilis)。该菌株经摇瓶发酵条件优化，其产酶活力由370U/mL提高至1180U/mL，20升发酵试验酶活达到1392U/mL。粗酶液经分离纯化后，得到比活力为3315.9U/mg的纯酶。 在盐碱地堆肥土壤中取十五份土样，用无菌水稀释后涂布于酪蛋白底物培养基上，将产生透明圈的菌株挑出，在55℃条件下用酪蛋白底物培养基划线培养，获得一株透明带宽度最大的菌株SR-15。经形态学观察、生理生化特性研究及全自动菌种鉴定仪鉴定，结果为枯草芽孢杆菌(BacillusSubtilis)。 通过单因子和正交试验获得高产蛋白酶的最佳发酵培养基组成为：玉米粉40g/L、黄豆粉40g/L、MgSO40.5g/L、NaCL10g/L、K2HPO41.0g/L，最适培养条件为起始pH值10.0、培养温度45℃、摇瓶转速190rpm、250mL三角瓶的装液量100mL。20升发酵试验，酶活达到1392U/mL，并且发酵时间缩短了8h。 发酵液经过硫酸铵盐析、SephadexG-75凝胶柱层析纯化，得到比活力为3315.9U/mg的纯酶，SDS-PAGE电泳测得分子量约27kDa。酶学特性研究表明，该酶最适pH为10，最适反应温度为60℃，在40℃～50℃范围内酶的稳定性最好，在pH9-10条件下酶稳定性相对较高，Ca2+、Mg2+对酶活有较明显促进作用，Ag+对酶活有较较强抑制作用。 该菌株所产碱性蛋白酶活力高，且在高温下较稳定，这一特性在制革工业、食品加工业、洗涤剂行业等领域将有巨大的应用价值，生产前景广阔。

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论文说明：缩略词表

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第一章前言

第二章耐热碱性蛋白酶产生菌株的筛选及菌种鉴定

2.1引言

2.2实验材料

2.3实验方法

2.4结果与分析

2.5讨论

第三章菌株SR-15产酶条件的优化

3.1引言

3.2实验材料

3.3实验方法

3.4结果与分析

3.5讨论

第四章耐热碱性蛋白酶的提纯与特性研究

4.1引言

4.2实验材料

4.3实验方法

4.4结果与分析

4.5讨论

参考文献

附录 硕士期间发表的论文

致 谢