玛咖酰胺的提取分离及其缓解体力疲劳活性的研究

摘要

玛咖酰胺是玛咖中特有的活性成分，具有缓解体力疲劳的功效。由于玛咖酰胺含量较少，且缺乏系统的提取分离工艺，目前关于玛咖酰胺缓解体力疲劳的研究主要集中在活性验证层面上。因此，本研究以玛咖块根为原料，通过酶辅助提取制备玛咖酰胺粗提物，再通过大孔树脂进行分离，最后研究获得的两种玛咖酰胺提取物缓解体力疲劳的活性并对其机理进行简单解析，为后续深入研究玛咖的抗疲劳机制提供科学依据。本论文的主要研究结果汇总如下:
　　(1)以总玛咖酰胺含量为指标，用响应面法优化酶辅助回流提取总玛咖酰胺的工艺。最佳工艺参数为:玛咖粉在纤维素酶添加量为1.5％，温度50℃，pH=4.5柠檬酸溶液中（玛咖粉与柠檬酸溶液料液比为1∶4，w/v）预处理2h后，按1∶16料液比加入95％乙醇，在70℃条件下回流提取2次，每次2.8h。按此工艺条件提取的总玛咖酰胺含量为2.12mg/g。
　　(2)通过比较四种大孔树脂对玛咖酰胺吸附和解吸能力，得X-5大孔树脂最适合用于玛咖酰胺粗提物的分离。玛咖酰胺粗提取物经X-5树脂分离的最佳工艺为:100mL质量浓度为0.212mg/mL的粗提物，以2mL/min上样流速，上样至柱体积为50mL的大孔树脂柱（约20g树脂，即1g树脂能吸附5mL质量浓度为0.212mg/mL的样液），静置吸附3.5h。先用水洗至洗脱液无色后，再用140mL90％乙醇（1g树脂需要7mL洗脱液），以2mL/min的洗脱流速进行洗脱。收集洗脱液，经浓缩回收溶剂，冷冻干燥，得浸膏中总酰胺含量为17.09mg/g。
　　(3)玛咖酰胺粗提取物(CME)和经分离后的玛咖酰胺提取物(PME)均具有显著的缓解体力疲劳效果，且PME的效果比CME的好。表现为:CME各剂量组比正常组游泳时间延长49.5-77.6％，而PME组则延长95.6-137.5％;PME各组游泳时间比阳性对照组显著延长44.8-75.9％，CME低剂量组与阳性对照组无统计学意义。且PME高剂量组游泳时间比CME低剂量组显著延长了58.8％。与阳性对照比，只有高剂量PME组肝糖原和肌糖原分别显著提高18.8％和25.2％;BLA显著降低7.26％;两种化合物对BUN效果均不好。CME和PME各剂量组，均比正常组显著降低运动后小鼠血清中LDH(8.10-20.04％)，CK(15.29-42.68％)、和NEFA(12.95-23.2％)的水平，且骨骼肌和心肌损伤程度均比正常组和阳性对照组表现轻微。这两种玛咖酰胺提取物缓解体力疲劳的机制可能在于调节运动中能量代谢过程，加速脂肪酸的氧化供能，减轻运动中对骨骼肌和心肌细胞膜的损伤。

目录

声明

致谢

摘要

第一章 前言

1．1 玛咖简介

1．2 玛咖酰胺类化合物研究进展

1．2．1 玛咖酰胺的理化性质

1．2．2 玛咖酰胺的检测

1．2．3 玛咖酰胺的提取

1．2．4 玛咖酰胺的分离

1．3 疲劳与缓解体力疲劳研究进展

1．3．1 疲劳的定义和分类

1．3．2 体力疲劳的机理

1．3．3 缓解体力疲劳的现状

1．4 玛咖酰胺缓解体力疲劳的研究现状

1．5．1 课题的目的及意义

1．5．2 课题研究内容

1．5．3 课题来源

第二章 玛咖酰胺提取工艺的优化

2．1 原料与试剂

2．2．1 主要原料

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要仪器

2．1．4 试验方法

2．1．5 单因素实验

2．1．6 响应面法优化试验

2．2 结果与分析

2．2．1 玛咖酰胺标品和样品色谱图

2．2．2 玛咖酰胺提取溶剂和方式的确定

2．2．3 酶的种类对总酰胺含量的影响

2．2．4 纤维素酶前处理条件的确定

2．2．5 回流提取单因素试验

2．2．6 回流提取的响应面优化试验

2．2．7 回流提取最优工艺条件的预测及验证

2．2．8 酶辅助提取总玛咖酰胺工艺条件的确定

2．3．本章小结

第三章 大孔树脂分离玛咖酰胺的工艺优化

3．1 材料与仪器设备

3．1．1 材料和试剂

3．1．2 实验仪器与设备

3．2 试验方法

3．2．1 大孔树脂分离法的操作步骤

3．2．2 大孔树脂的参数

3．2．3 大孔树脂的使用方法

3．2．4 上柱液的制各

3．2．5 大孔树脂型号的确定

3．2．6 X-5大孔树脂静态吸附、解吸条件的考察

3．2．7 X-5树脂动态吸附解吸条件的考察

3．3 结果与讨论

3．3．1 静态吸附大孔树脂型号的筛选

3．3．2 X-5大孔树脂静态吸附解吸结果

3．3．3 X-5大孔树脂动态吸附与解吸条件的确定

3．3．4 X-5 大孔树脂分离玛咖酰胺的工艺条件

3．3．5 玛咖酰胺粗提物经大孔树脂分离的效果

3．4 本章小结

第四章 玛咖酰胺提取物缓解体力疲劳活性的研究

4．1 试验材料与仪器设备

4．1．1 试验原料

4．1．2 主要试剂和材料

4．1．3 实验动物

4．1．4 仪器设备

4．2 实验方法

4．2．1 实验动物分组及剂量

4．2．2 玛咖酰胺提取物对小鼠游泳耐力的影响

4．2．3 生化指标的检测

4．2．4 玛咖酰胺提取物抗疲劳机理初步探索

4．3 数据统计与结果分析

4．4 结果与讨论

4．4．1 玛咖酰胺提取物对小鼠体重的影响

4．4．2 对负重游泳力竭时间的影响

4．4．3 玛咖酰胺提取物对肌、肝糖原的影响

4．4．4 玛咖酰胺提取物对BUN的影响

4．4．5 玛咖酰胺提取物对BLA的影响

4．4．6 玛咖酰胺提取物对LDH、CK和NEFA的影响

4．4．7 玛咖酰胺提取物对心肌、骨骼肌损伤的保护作用

4．5 本章小结

第五章 结论与展望

5．1 结论

5．2 问题与展望

参考文献

攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况