脂联素对皖南花猪骨骼肌生长和肌纤维类型的影响

摘要

本试验研究分为三部分，旨在研究脂联素(ADP)对不同日龄皖南花猪骨骼肌生长和肌纤维类型的影响。
　　 1．采用传统的肌球蛋白ATP酶染色法，研究不同日龄(0、30、45、90和180d)皖南花猪背最长肌不同类型肌纤维面积和比例的发育性变化，并比较分析性别间的差异。结果表明：
　　 (1)除30～45d2a、2b型肌纤维外，背最长肌各种类型肌纤维的面积总体上均随年龄的增长而增加，其中在90～180d的增加幅度最大。
　　 (2)背最长肌肌纤维的比例总体上随年龄的增长有明显的发育性变化。其中，0～30dⅠ型肌纤维比例极显著降低，2b型肌纤维比例极显著提高。0～90d，2a型肌纤维比例无明显变化。90～180d，2a型肌纤维比例极显著提高，2b型肌纤维比例无明显变化。
　　 (3)大多数日龄背最长肌肌纤维面积和比例在性别间的差异不显著，即性别对皖南花猪背最长肌肌纤维生长和类型组成没有显著的影响。
　　 2．采用实时荧光定量PCR(SYBR GreenⅠ法)研究皖南花猪不同日龄(0、30、45、90和180d)背最长肌和半腱肌中AdipoR1和AdipoR2及肌球蛋白重链(MyHC)4种亚型MyHCI、My HC2a、MyHC2b、MyHC2x mRNA表达量的发育性变化，并比较分析这几种基因表达量在肌肉类型和性别间的差异。结果表明：
　　 (1)背最长肌和半腱肌AdipoR1 mRNA表达水平随年龄增长而提高。AdipoR2mRNA的表达量在0～30d极显著下降，30～180d保持在相对稳定的水平。
　　 (2)0～30d，背最长肌和半腱肌MyHCI和MyHC2x mRNA表达水平没有发生明显变化，但背最长肌MyHC2amRNA表达量有极显著下降，MyHC2b mRNA表达量极显著升高。90～180d，背最长肌MyHC2a、MyHC2x和MyHC2b mRNA表达量有极显著升高，半腱肌变化不明显。总体上，皖南花猪背最长肌和半腱肌MyHC四个亚型基因表达量随年龄的增长有发育性变化，即随着猪的生长发育，氧化型肌纤维表达量逐渐减少，而酵解型肌纤维表达量逐渐增加。
　　 (3)半腱肌My HCIm RNA表达量在各个日龄均高于背最长肌，尤其是在180 d，两者差异极显著。总体来看，背最长肌MyHC2a和MyHC2x、MyHC2b mRNA表达量极显著高于半腱肌。
　　 (4)刚出生时，母猪背最长肌MyHC2b mRNA表达水平极显著高于公猪。30d时，公猪背最长肌MyHCI和半腱肌MyHC2a mRNA表达水平显著高于母猪。45d母猪半腱肌MyHCI、My HC2x、MyHC2b mRNA表达水平显著高于公猪。90d时，公猪半腱肌MyHC2a极显著高于母猪。从总体上来看性别对四种肌纤维类型组成的影响不大，即皖南花猪公母猪之间MyHC四个亚型基因表达的发育模式没有显著差异。
　　 3．用不同浓度（0、1、5、10μg/ml）的重组ADP处理皖南花猪的骨骼肌卫星细胞，采用实时荧光定量PCR（SYBR GreenⅠ法）检测处理12、24 h的骨骼肌细胞中ADP及其受体、MyHC4种亚型、AMPK、PPARa的基因表达，研究ADP对骨骼肌发挥作用的信号途径及对肌纤维类型组成影响。结果表明：
　　 (1)添加1μg/ml重组ADP处理12和24 h后，ADP和AdipoR1基因表达量极显著增加，但AdipoR2的基因表达量在24 h极显著增加。添加5和10μg/ml重组ADP处理后，ADP、AdipoR1和AdipoR2的基因表达量低于lμg/ml处理组。
　　 (2)添加1μg/ml重组ADP处理12和24 h，其MyHCI和MyHC2x的基因表达量极显著高于对照组。在12 h，MyHC2a的基因表达量增加，但差异不显著。MyHC2b的基因表达量变化主要在24 h有极显著下降。5和10μg/ml处理组MyHCI、My HC2a、MyHC2b的基因表达量均低于1μg/ml处理组，在12 h，5μg/ml处理组My HC2x的基因表达量极显著高于1μg/ml处理组。
　　 (3)1、5、10μg/ml重组ADP处理12 h后，AMPK基因表达量极显著高于对照组，但是低剂量组具有较高的基因表达量。添加1μg/ml重组ADP处理12和24 h，PPARa基因表达量极显著高于对照组，然而高剂量组没有这种效应。以上结果提示，ADP作用于骨骼肌，可能是与受体结合后激活AMPK和PPARa两个信号途径。ADP能够提高MyHCI、My HC2a、MyHC2x和降低MyHC2b基因表达量，改变肌纤维组成，进而达到改善胴体品质的目的。