桑树乳汁中DNJ的含量测定及其对小鼠降血糖效果研究

摘要

乳汁是植物乳汁管分泌的一种特殊物质，桑科植物多数有乳汁。桑科中桑树的乳汁主要含有蛋白质、糖、脂肪、生物碱等。桑树的生物碱-1-脱氧野尻霉素(DNJ)是一种能高效抑制α-葡萄糖苷酶活性，可以用来治疗糖尿病的天然产物。桑树乳汁中DNJ含量远远高于桑树其它组织，具有重要的研究价值。本论文以桑树乳汁为研究对象，对桑树乳汁中DNJ的提取、含量测定和桑树乳汁的降血糖效果进行了研究分析，为桑树乳汁的综合利用提供理论参考依据。
　　 本实验采用柱前衍生化反相高效液相色谱-紫外检测法(RP-HPLC-UV)测定桑树乳汁中DNJ含量。以70％的乙醇为溶剂提取桑树乳汁中的DNJ，9-芴甲基氯甲酸甲酯(FMOC-Cl)为衍生化试剂，在pH=8.5的硼酸钾缓冲液中进行衍生化反应，生成具有紫外吸收的衍生物DNJ-FMOC，RP-HPLC-UV法测定DNJ-FMOC含量。实验结果表明：衍生物DNJ-FMOC的色谱峰分离效果好，DNJ-FMOC的峰面积与DNJ浓度呈线性关系。RP-HPLC-UV法测定桑树乳汁中DNJ含量回收率高、重现性好、精密度高、稳定性好，说明该方法可靠，可以作为桑树乳汁、桑树其它组织和相关药物中DNJ含量测定的有效方法。
　　 用RP-HPLC-UV法测定夏季“农桑14号”不同部位乳汁中DNJ含量，结果发现桑树不同部位乳汁中DNJ含量（湿重）有较大差异，其中枝干中部乳汁中DNJ含量最高，达0.63376％，其次是枝条顶端乳汁，为0.58128％，主干基部乳汁DNJ含量最低，为0.16382％。
　　 测定秋季“湖桑32号”、“农桑8号”、“农桑14号”、“育71-1”四个桑树品种枝干中部乳汁中DNJ含量。结果显示：四个桑树品种乳汁中的DNJ含量（湿重）有一定差异。含量最高的是“农桑14号”，高达0.41312％。“湖桑32号”、“农桑8号”、“育71-1”等三个桑树品种的乳汁中DNJ含量分别为0.15861％、0.27855％、0.27962％。
　　 分别采集不同季节的“农桑14号”枝条顶端、枝干中部、主干基部三个不同部位的乳汁，提取纯化乳汁中的DNJ，RP-HPLC-UV法测定其含量（湿重）。结果表明：四个季节都是桑树枝干中部乳汁中DNJ含量最高，主干基部最低。桑树枝干中部乳汁在春、夏、秋、冬四个季节的DNJ含量差异较大，分别为0.10352％、0.63376％、0.41312％、0.13588％，在夏季最高。桑树主干基部乳汁中的DNJ含量分别为0.04836％、0.16382％、0.16459％、0.06602％。
　　 分别以0.25ml(DNJ含量为2.0496mg)、0.5ml的桑树乳汁(DNJ含量为4.0992mg)的剂量灌喂链脲佐菌素高血糖小白鼠，比较给药前后不同动物实验组小白鼠血糖值的下降百分率，桑乳汁灌喂A组(4.0992mg/d)、桑乳汁灌喂B组(2.0496mg/d)、阳性药物对照组的高血糖小白鼠的血糖值7天后分别下降了22.22％、6.43％、26.8％，14天后分别下降了26.06％、12.27％、21.92％。实验结果表明：桑树乳汁对由链脲佐菌素(STZ)所致的高血糖小白鼠有显著的降血糖效果。当给高血糖小白鼠灌喂6mg/d的桑树乳汁时，七天后桑树乳汁的降血糖效果已接近阳性药物对照组（拜糖平）的水平，14天后超过阳性药物对照组。桑树乳汁还有抑制糖尿病小白鼠体重减轻的作用，对小白鼠进食量及饮水量的增多也有一定的抑制作用。
　　 桑树乳汁中DNJ的含量测定结果为探究DNJ在桑树组织中的分布，以及桑树乳汁的采集利用提供了重要的理论依据。桑树乳汁的降血糖效果为进一步开发治疗糖尿病的药物和保健食品提供了方向。