甘薯可溶性蛋白的提取、纯化及胰蛋白酶抑制剂活性的研究

摘要

本文以甘薯为原料，比较了水、不同浓度的NaCl溶液和0.1M的NaOH溶液对甘薯可溶性蛋白的提取效果，结果发现不同溶剂对甘薯可溶性蛋白的提取率依次为0.1M NaOH溶液>水>不同浓度NaCl溶液，由这几种蛋白提取液制得的蛋白粉的纯度依次为水>不同浓度NaCl溶液>0.1M NaOH溶液。甘薯浆液的超滤浓缩倍率所制得的蛋白粉呈线性正相关(相关系数均为0.95，p=0.01)，随着浓缩倍数的递增，蛋白粉的纯度也逐渐增加。 本文采用了先过离子交换层析，再凝胶过滤层析的方法对甘薯可溶性蛋白Sporamin进性纯化，结果表明：经过DEAE-52离子交换纤维素纯化的甘薯可溶性蛋白，对于胰蛋白酶的比抑制百分率为281.69﹪/mg，纯化得率为14.32﹪，纯化倍数为3.51倍；经过Sephadex G-75葡聚糖凝胶过滤纯化得到的Sporamin可以达到电泳纯，它对于胰蛋白酶的比抑制百分率为513.73﹪/mg，纯化得率为13.54﹪，纯化倍数为6.40倍。 热处理会导致Sporamin的胰蛋白酶抑制剂活性的下降。80℃加热会使Sporamin部分失活，但100℃Sporamin仍不会完全失活。Sporamin的胰蛋白酶抑制剂活性经200MPa-600MPa压强处理后不变，说明600MPa仍然没有达到胰蛋白酶抑制剂变性的临界压力。但600MPa的加压处理可以杀灭样品中的微生物。通过对比热压处理前后的Sporamin的CD图谱，发现热压都会导致Sporamin的结构的变化。 从本文的研究可以看出甘薯可溶性蛋白的胰蛋白酶抑制剂活性在加压处理下十分稳定，加压可以用作今后甘薯可溶性蛋白以及其它一些胰蛋白酶抑制剂保持活性的加工手段，关于其相关的临界条件及作用机理有待于进一步研究。

目录

文摘

英文文摘

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第一章文献综述及立题分析

1.1甘薯可溶性蛋白的研究进展

1.1.1甘薯可溶性蛋白Sporamin的研究进展

1.1.2甘薯糖蛋白的研究

1.2蛋白酶抑制剂的研究进展

1.2.1胰蛋白酶抑制剂的研究进展

1.2.2甘薯胰蛋白酶抑制剂的研究进展

1.3立题分析

1.3.1立题背景

1.3.2立题意义

1.4实验内容设计

1.5技术路线

第二章甘薯可溶性蛋白的提取和回收研究

2.1前言

2.2材料与方法

2.2.1材料、主要药品与设备

2.2.2实验方法

2.3结果与讨论

2.3.1不同溶剂中甘薯蛋白的分配比率及其对甘薯蛋白提取率及纯度的影响

2.3.2不同溶剂对甘薯蛋白提取率及纯度的影响

2.3.3甘薯浆液超滤浓缩倍率对蛋白含量的影响

2.4结论

第三章Sporamin的纯化和分离研究

3.1前言

3.2材料与方法

3.2.1材料、主要药品与设备

3.2.2实验方法

3.3结果与讨论

3.3.1甘薯可溶性蛋白纯化工艺及参数

3.3.2 SDS-PAGE检验其纯度

3.3.3各纯化步骤中的蛋白得率和纯化倍数

3.3.4 Sporamin A和Sporamin B的分离

3.4结论

第四章热压对甘薯可溶性蛋白的胰蛋白酶抑制剂活性的影响的研究

4.1前言

4.2材料与方法

4.2.1材料、主要药品与设备

4.2.2实验方法

4.3结果与讨论

4.3.1不同浓度的Sporamin的胰蛋白酶抑制剂活性

4.3.2加热对Sporamin的胰蛋白酶抑制剂活性的影响

4.3.3加压对Sporamin的胰蛋白酶抑制剂活性的影响

4.3.4加压对甘薯可溶性蛋白和大豆浓缩蛋白的胰蛋白酶抑制剂活性的影响

4.3.5 Sporamin的胰蛋白酶抑制剂活性染色

4.3.6加压与未加压处理的甘薯可溶性蛋白/大豆分离蛋白的微生物检验结果

4.3.7加压和加热处理对Sporamin的结构的影响

4.4结论

第五章总结与展望

5.1实验总结

5.1.1甘薯可溶性蛋白的提取和回收研究

5.1.2 Sporamin的纯化研究

5.1.3热压对甘薯可溶性蛋白的胰蛋白酶抑制剂活性的影响的研究

5.2论文的创新点

5.3工作展望

参考文献

致 谢

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硕士在读期间发表的文章