联合应用选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398和脂氧合酶抑制剂NDGA对人肝癌细胞株HepG-2增殖及凋亡的影响

摘要

肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一，近二十年来，我国HCC的死亡率增加了41.7％，约占全世界HCC死亡人数的42％。目前，手术切除仍是治疗HCC的最佳手段，但本病起病隐匿，病情发展迅速，大多数患者就诊时已发展到中晚期，失去了手术治疗的机会，患者5年生存率低于％。环氧合酶(cylooxygenases,COX)和脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)是体内催化花生四烯酸(arachidonic acid，AA)代谢的两个关键酶。细胞膜上的磷脂在磷脂酶A2作用下释放出AA，AA经COX和LOX两条通路代谢产生一系列的生物活性物质，如前列腺素(PG)、血栓烷素A2(TXA2)、羟基廿碳四烯酸(HETEs)和白细胞三烯(LTs)等。通过这些活性物质，COX及LOX影响细胞信号转导及代谢，进而对包括肿瘤，炎症在内的多种疾病产生作用。NS-398是一种选择性COX-2抑制剂，与传统的非甾体类抗炎药(nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)不同的是其抑制COX-1的作用非常弱，从而减轻了胃肠道的不良反应。目前其已被发现能够抑制肝癌细胞增殖和诱导细胞周期阻滞。LOX抑制剂NDGA对于人肝癌细胞株HepG2细胞具有明显生长抑制作用，同时还可以诱导HepG2细胞凋亡，引起细胞周期被阻滞于G1/S期。本研究选用人肝癌细胞株：HepG2作为研究对象，探讨NS-398和NDGA联合应用对人肝癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及对bcl-2mRNA表达的影响，为将NS-398和NDGA联合应用于HCC的治疗提供初步的实验依据。 目的： 探讨单独和联合应用选择性环氧合酶-2抑制剂(cyclooxygenase-2 selectiveinhibitor)NS-398和脂氧合酶抑制剂(lipoxygenase inhibitor)NDGA对于人肝癌细胞株HepG2的增殖、凋亡和对bcl-2mRNA表达的影响。 方法： (1)采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测单独及联合应用NS-398和NDGA对于人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用并应用金正均法判断两药的相互作用。 (2)采用DNA末端原位标记染色法(TUNEL法)观察药物作用后人肝癌细胞株HepG2的形态学改变并计算凋亡指数(apoptosis index，AI)。 (3)采用流式细胞术检测药物作用后对于人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡率。 (4)采用RT-PCR检测药物作用后人肝癌细胞株HepG2中bcl-2 mRNA的表达。 结果： (1)MTT结果显示NS-398(20～160μmol/L)或NDGA(25~200μmol/L)单独应用对人肝癌细胞株HepG2均有增殖抑制作用，药物浓度越高，抑制作用越强，呈现明显的剂量效应关系。系列浓度NS-398或NDGA作用于细胞24h、48h、72h后观察细胞的生长情况，结果显示NS-398或NDGA作用时间越长，对上述细胞的抑制作用越强，呈明显的时间效应关系。依据金正均法NS-398在20～160μmol·L-1浓度范围内与NDGA 25~100 μmol·L-1浓度范围内及NS-398 20 μmol·L-1与NDGA 200 μmol·L-1联合应用显示出协同作用(q>1.15)，余浓度联合应用显示相加作用(0.85

目录

论文说明：英文缩略词表

声明

1前言

2实验材料

3实验方法

4结果

5讨论

6结论

7参考文献

附录

致谢

综述：环氧合酶-2及其抑制剂在肝细胞癌中的研究进展