乳腺癌耐药蛋白BCRP高表达细胞株的构建及黄酮类倾倒物逆转耐药性的研究

摘要

乳腺癌是女性多发的恶性肿瘤，严重威胁了妇女的身心健康。在我国乳腺癌发病率居女性恶性肿瘤的首位。造成乳腺癌患者化学治疗失败的一个主要原因就是肿瘤细胞对多种化疗药物产生多药耐药性(MDR)。因此，深入研究肿瘤细胞产生耐药性的机制，寻找和发现关键靶点，并针对靶点设计能够增加肿瘤细胞对化疗药物敏感性的辅助药物，是降低乳腺癌死亡率、提高治愈率的关键。
　　 BCRP/ABCG2属于ABC转运蛋白超家族G亚族的第二位成员，是导致临床乳腺癌治疗失败的最主要原因之一。BCRP广泛分布于组织和器官中，BCRP对其底物药物在体内的吸收、分布、排泄都发挥了重要作用。此外，BCRP在肿瘤细胞的侧群细胞中高表达，使之可作为检测相关干细胞的标记物。现已发现许多潜在的BCRP抑制剂，可为临床治疗由BCRP介导的肿瘤多药耐药提供新的治疗策略。目前关于BCRP的转运分子机制尚不十分清楚。
　　 本论文运用不同的方法构建了M78-S1/bcrp、pLJM1/bcrp重组质粒，并通过脂质体法和病毒侵染的方法将重组质粒转染至乳腺癌细胞株MCF-7以及人肾上皮细胞293T中，利用嘌呤霉素筛选稳定克隆，得到BCRP稳定高表达的细胞株MCF-7/BCRP、293T/BCRP，并利用半定量RT-PCR和Western-blot方法，分别从mRNA水平和蛋白质水平分析BCRP的表达水平;用MTT比色法检验BCRP高表达细胞株对罗丹明123、阿霉素等药物的敏感性;并用天然黄酮类化合物处理BCRP高表达的耐药细胞株MCF-7/BCRP、293T/BCRP，利用MTT比色法测定BCRP高表达的细胞株活力，分析检测黄酮类化合物增强细胞株对罗丹明123、阿霉素等药物的敏感性，结果表明:黄酮类化合物7，5’-二羟基黄酮、7，4'，5'-三羟基黄酮、7-羟基-3’-甲氧基黄酮能有效抑制BCRP活性，引起肿瘤细胞对化疗药物阿霉素的敏感性;此结果表明黄酮类化合物可逆转由BCRP介导的多药耐药，为乳腺癌临床治疗提供了新的思路，为筛选出能有效抑制由BCRP介导的多药耐药提供天然的黄酮类先导化合物。

目录

声明

摘要

缩略表

第一章 绪论

1 BCRP／ABCG2的发现

2 BCRP的结构与功能

3 BCRP的组织分布及在药物代谢中的作用

4 BCRP的转运底物

4．1 外源性底物

4．2 内源性底物

5 BCRP的抑制剂

5．1 BCRP特异性抑制剂

5．2 ABC转运蛋白家族的广谱特异性抑制剂

5．3 酪氨酸激酶抑制剂(The Tyrosine kinase inhibitors，TKIs)

5．4 BCRP的黄酮类化合物及其衍生物抑制剂

6 BCRP对干细胞增值和分化的影响

7 展望

8 本课题研究目的和意义

第二章 BCRP乳腺癌稳定高表达细胞株MCF-7／BCRP的构建及鉴定

1 前言

2 实验材料、试剂和仪器

2．1 实验材料

2．2 实验试剂

2．3 主要仪器

2．4 相关溶液配置

3 实验方法

3．1 BCRP表达载体pLJM1／bcrp的构建

3．2 BCRP乳腺癌稳定高表达细胞株MCF-7／BCRP的构建

4 结果

4．1 重组表达载体载体pLJM1／bcrp的构建结果

4．2 MCF-7／BCRP高表达细胞株的构建结果

5 讨论

第三章 BCRP人肾细胞稳定高表达细胞株293T／BCRP的构建及鉴定

1 前言

2 实验材料、试剂和仪器

3 实验方法

3．1 BCRP表达载体M78-S1／bcrp的构建

3．2 BCRP人肾细胞稳定高表达细胞株293T／BCRP的构建

4 结果

4．1 M78-S1重组表达载体构建结果

4．2 BCRP稳定高表达细胞株293T／BcRP的构建

5 讨论

第四章 BCRP外排功能及黄酮类化合物逆转耐药性研究

1 前言

2 实验材料、试剂和仪器

2．1 实验材料

2．2 实验试剂

2．3 主要仪器

2．4 相关溶液配置

3 实验方法

3．1 MTT比色法检测BCRP高表达细胞株对阿霉素、罗丹明123敏感性影响

3．2 MTT比色法测定加入阿霉素以及黄酮类化合物后的细胞活力情况

4 结果

4．1 MTT比色法测定加入阿霉素和罗丹明123后细胞增殖结果

4．2 MTT比色法测定加入阿霉素以及黄酮类化合物后细胞活力结果

5 讨论

第五章 结论与展望

1 结论

2 展望

参考文献

致谢