人FN cDNA重组逆转录病毒载体及高表达FN肿瘤细胞株的构建

摘要

目的:探讨FN对肿瘤细胞生物学行为的影响,将人FN cDNA基因导入低表达FN的肿瘤细胞株253J中,构建高表达FN的肿瘤细胞株253FN.方法:通过DNA重组技术,将人全长FNcDNA片段插入到逆转录病毒载体pLJ中,经PA317细胞包装,生产出4代病毒液,感染NIH3T3细胞后,测得假病毒滴度.用高滴度病毒液感染253J细胞,经400μg/ml G418筛选,产生抗性克隆.继续传代培养,一步法提取细胞总RNA,进行Northern印迹杂交.结果:253FN细胞除7.6kb处显示微弱的内源杂交带以外,在9.6kb处有一条较强的杂交带;免疫组化结果显示253FN细胞的胞浆及胞膜均为棕红着色,而253J细胞和空载体转染细胞仅轻微着色.结论:转染后的细胞染色体中成功地整合了FN cDNA片段,并能够在转录水平和蛋白水平表达.从而建立了高表达FN的肿瘤细胞株,为深入研究肿瘤的转移机理奠定了基础.