人Fn14基因真核重组质粒的构建及其表达

摘要

目的构建人成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(fibroblast growth factor-inducible 14,Fn14)基因真核重组质粒及其表达。方法从人肝细胞癌组织抽取总RNA,RT-PCR扩增出Fn14基因全长cDNA,经测序正确后,核酸内切酶EcoRⅠ、XbaⅠ酶切PCR产物,亚克隆入pcDNA 3.1-Myc载体,重组质粒pcDNA 3.1-Myc-Fn14经酶切及测序鉴定正确后转染COS-7细胞,通过免疫组织化学DAB法检测Myc-Fn14融合蛋白的表达。结果重组质粒pcDNA 3.1-Myc-Fn14经EcoRⅠ、XbaⅠ酶切及测序鉴定正确,重组质粒包含人Fn14基因完整编码区。免疫组织化学检测结果显示,重组质粒转染COS-7细胞后成功表达Myc-Fn14融合蛋白,转染空载体pcD-NA 3.1-Myc的COS-7细胞未见Myc-Fn14融合蛋白表达。结论构建了人Fn14基因真核表达载体,该重组质粒可表达含Myc-Fn14的融合蛋白,为研究Fn14功能奠定了基础。