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【6h】

鸭蛋壳膜酶水解及其水解物的分离提取与应用技术研究

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致谢

摘要

1.引言

1.1 蛋壳膜的成份及理化特性

1.1.1 角蛋白

1.1.2 粘多糖

1.1.3 活性多肽

1.1.4 氨基酸

1.2 角蛋白的水解方法研究进展

1.2.1 碱提取法

1.2.2 氧化法

1.2.3 还原法

1.2.4 机械法

1.2.5 电化学还原法

1.2.6 酶解法

1.3 蛋壳膜水解的研究进展

1.4 蛋壳膜中生物活性成份的功能研究进展

1.4.1 角蛋白的功能

1.4.2 粘多糖的生理功能

1.4.3 生物活性肽的生理功能

1.5 蛋壳膜中生物活性成份的应用

1.5.1 医药领域的应用

1.5.2 材料领域的应用

1.5.3 化妆品业的应用

1.5.4 食品行业的应用

1.6 本课题研究的意义和内容

1.6.1 研究意义

1.6.2 主要研究内容

2.鸭蛋壳膜酶水解的预处理方法比较

2.1 材料与仪器

2.2 试验方法

2.2.1 原料处理

2.2.2 蛋壳膜水解

2.2.3 蛋膜水解率的计算

2.2.4 粘多糖得率的测定

2.3 试验结果与分析

2.4 讨论

3.鸭蛋壳膜还原剂预处理工艺优化

3.1 材料与仪器

3.2 试验方法

3.2.1 原料处理

3.2.2 蛋壳膜的还原法处理

3.2.3 蛋壳膜的化学处理单因素试验设计

3.2.4 还原法预处理效果的评定

3.3 结果与分析

3.4 讨论

4.鸭蛋壳膜双酶水解提取粘多糖工艺研究

4.1 材料与仪器

4.2 试验方法

4.2.1 粘多糖提取工艺

4.2.2 蛋白酶的选择

4.2.3 双酶水解的单因素试验

4.2.4 双酶水解响应面优化试验

4.2.5 粘多糖的测定

4.3 结果与分析

4.3.1 蛋白酶的选择

4.3.2 双酶水解的单因素试验

4.3.3 二次回归正交旋转组合试验结果

4.4 小结

4.5 讨论

5.鸭蛋壳膜酶水解制备蛋白多肽工艺研究

5.1 材料与仪器

5.2 试验方法

5.2.1 蛋膜蛋白酶解工艺

5.2.2 蛋白酶的选择

5.2.3 酶水解的正交试验

5.2.4 氨基酸的测定

5.2.5 多肽的测定

5.2.6 氮得率的测定

5.2.7 鸭蛋壳膜水解液肽分子量分布的测定

5.3 结果与分析

5.3.1 蛋白酶选择结果

5.3.2 正交试验结果

5.3.3 鸭蛋壳膜水解多肽分子量分布试验结果

5.4 讨论

6.鸭蛋壳膜酶水解液护肤品研制

6.1 材料与仪器

6.2 试验方法

6.2.1 鸭蛋壳膜护肤品基本配方的设计

6.2.2 鸭蛋壳膜护肤品的制作工艺

6.2.3 鸭蛋壳膜护肤品制作单因素试验

6.2.4 鸭蛋壳膜护肤品制作正交试验

6.2.5 护肤品吸湿度的测定

6.2.6 护肤品保湿率的测定

6.3 结果与分析

6.3.1 单因素试验结果

6.3.2 鸭蛋壳膜护肤品正交试验结果

6.4 讨论

7.全文小结

参考文献

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摘要

本课题主要研究:(1)鸭蛋壳膜酶水解的预处理方法比较;(2)鸭蛋壳膜双酶水解提取粘多糖工艺研究;(3)鸭蛋壳膜酶水解制备蛋白多肽工艺研究;(4)鸭蛋壳膜酶水解液护肤品研制。
  分别用熔融尿素法、3-巯基丙酸还原法、硫化钠还原法来预处理鸭蛋壳膜,以鸭蛋壳膜分解率与D-葡萄糖醛酸提取率为指标衡量水解效果,最终筛选出硫化钠还原法为最佳的鸭蛋壳膜预处理方法。
  采用硫化钠还原法来打开鸭蛋壳膜角蛋白中的二硫键,设计了五因素四水平正交试验,考察了固液比、十二烷基硫酸钠用量、氨水用量、时间和硫化钠用量五个因素。结果表明:各因素对蛋壳膜二硫键打开的效果影响从大到小为固液比>十二烷基硫酸钠用量>氨水用量>时间>硫化钠量,优化后的工艺条件为每克蛋壳膜添加十二烷基硫酸钠0.37g、硫化钠0.80g,固液比1∶20,氨水占总液比67%,反应时间3.5h。
  采用还原-双酶解法水解鸭蛋壳膜提取粘多糖,通过二次回归正交旋转组合试验探索了双酶水解的酶用量、双酶比例、总水解时间三个因素对粘多糖得率的影响,得到最佳条件为:碱性蛋白酶与胰蛋白酶比例0.10678,水解总时间15.364h,酶总用量66820u/g。在此条件下进行验证试验,D-葡萄糖醛酸得率为6.75mg/g,与理论极值为6.90mg/g接近。
  采用还原-酶解法水解鸭蛋壳膜制备蛋白多肽,设计了三因素三水平正交试验,考察了时间、固液比、酶量三个因素。结果表明:在试验范围内三个因素三个水平的氮得率均在92%左右且差异不大,三个因素的变化对氮得率的影响都很小;三种因素对多肽含量的影响从大到小依次是时间>固液比>酶量;三种因素对氨基酸含量影响从大到小依次是酶量>时间>固液比。最佳条件为反应时间6h,固液比1∶15,酶用量20000u/g,在此条件下鸭蛋壳膜水解液的氮得率约92%,产物多肽中分子量属于活性多肽的占90%以上。
  用制得的鸭蛋壳膜水解液制作护肤品,设计了三因素三水平正交试验,考察了鸭蛋壳膜水解液用量、丙三醇用量、聚乙烯吡咯烷酮用量三个因素。结果表明:三个因素对吸湿率的影响由大到小为丙三醇用量>鸭蛋膜水解液用量>聚乙烯吡咯烷酮用量,对保湿率的影响由大到小为鸭蛋壳膜水解液用量>丙三醇用量>聚乙烯吡咯烷酮用量,保湿率最佳的组合为:鸭蛋壳膜水解液25%,丙三醇15.4%,聚乙烯吡咯烷酮2.93%;吸湿率最佳的组合为:鸭蛋壳膜水解液20%,丙三醇15.4%,聚乙烯吡咯烷酮2.93%。

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