欧文氏杆菌变异菌株CXJZ11-01分泌木聚糖酶的分离纯化及其酶学性质研究

摘要

本文采用透明圈平板筛选、单因子及多因子正交试验、超滤浓缩、Sephadex G-100凝胶层析、SDS-PAGE等方法，从现有菌种资源筛选出一个产木聚糖酶菌株，并对该菌株的适宜发酵条件、产酶规律、分离纯化方法和酶学特性进行了初步研究，得到电泳纯木聚糖酶样品，为木聚糖酶的工业化生产和应用提供了科学依据。通过本实验得出以下结论： 1、从现有菌种资源中筛选出1个高产木聚糖酶的Erwinia carotovora变异菌株，编号为CXJZ11-01。 2、获得该菌株适宜生长和发酵培养基最佳配方，以蛋白胨作为该菌株发酵培养基的碳源，发酵8.0h即出现产酶高峰，发酵液酶活达到344U/ml。 3、变异菌株CXJZ11-01所产木聚糖酶最佳测定体系：0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；pH5.8；以木聚糖为底物，浓度0.8﹪；温度60℃；DNS量2.0ml～2.5ml；显色时间5min；测定波长540nm。 4、变异菌株CXJXZ11.01所产木聚糖酶优化分离条件为：50kD、10kD、5kD膜包超滤浓缩及Sephadex G-100凝胶层析。木聚糖酶的纯化倍数为13.25，收率为45.4﹪，通过SDS-PAGE得到单一条带，测定其分子量为29.3kD。 5、变异菌株CXJZ11-01所产木聚糖酶的酶学性质为：稳定pH范围3.4～6.4，作用pH范围4.0～7.0，最适pH5.8；热稳定温度在60℃以下，适宜温度范围是35℃～60℃；Fe<'2+>、Co<'2+>和Mn<'2+>对木聚糖酶有激活作用，Cu<'2+>对木聚糖酶有强烈的抑制作用，酶液在2mmol/L的Cu<'2+>溶液中保存12h，酶活损失93﹪；以燕麦木聚糖为底物，Km为0.5mg/L，Vmax为33.31μmol/(min·ml)。

目录

文摘

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引言

第一章文献综述

1.1木聚糖

1.2木聚糖水解酶

1.3木聚糖酶的来源及其性质

1.4木聚糖酶的分类、性质及酶活测定

1.5木聚糖酶的分离、纯化

1.6木聚糖酶的应用

1.7本研究的目的和意义

第二章材料与方法

2.1材料

2.2方法

第三章结果与分析

3.1高产木聚糖酶菌株的筛选

3.2培养基的优化

3.3产酶规律研究

3.4酶活力测定技术体系

3.5木聚糖酶分离技术

3.6木聚糖酶酶学性质

第四章讨论

4.1变异菌株CXJZ11-01产酶的生产效率评价

4.2超滤条件的选择

4.3变异菌株CXJZ11-01分泌的木聚糖酶可能为非诱导型表达

4.4变异菌株CXJZ11-01分泌的木聚糖酶有可能为单体蛋白

4.5变异菌株CXJZ11-01分泌木聚糖酶的纯化步骤还有待进一步探索

第五章结论

参考文献

致谢

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