食品中蜡样芽孢杆菌检测方法的分析及建立改进方法的研究

摘要

蜡样芽孢杆菌是一种常见的食品污染菌和条件致病菌，与大量的食物中毒事件有关，严重影响人们的身体健康和生命安全。目前在我国相关食品的标准中，并没有明确蜡样芽孢杆菌的限量规定值，造成对该菌的生产控制无法可依，另外由于我国的检测方法与国际方法存在不一致，导致国内外检测结果出现了较大的差异。
　　本研究在新疆石河子地区采集生牛乳、鲜肉、街边小吃及过夜剩米饭4类共40份样品，蜡样芽孢杆菌检测结果显示4类食品中均有检出，40份样品的平均检出率为22.5％，阳性样品中蜡样芽孢杆菌的污染水平从1.5×102 CFU/g(mL)～3.0×105 CFU/g(mL)不等。对国内外蜡样芽孢杆菌的检测方法：GB/T4789.14-2003、SN/T0176-2013、EN ISO7932-2004分别进行分析与研究，结果证明GB检测方法存在容易污染、菌落漫延连接难以计数、菌落生长迅速影响计数准确性、易受杂菌影响检测灵敏性等缺陷；SN检测方法中的MPN计数方法，个别步骤规定不明确，可能会因漏检影响结果的准确，并且该方法的鉴定工作量十分大，检测成本较高；ISO检测方法简单方便，只局限于检测疑似蜡样芽孢杆菌，不能区分蜡样芽孢杆菌与其他十分相近但比较少见的芽孢杆菌，因此可能导致错误和遗漏。通过大量使用API50 CHB生化鉴定系统获得的经验，可以确认影响该鉴定系统准确性的因素包括培养物的纯度、菌悬液的浓度等，同时，API50 CHB鉴定系统无法区分蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌，仍然需要借助蛋白毒素结晶试验来确定。结合国内外相关的蜡样芽孢杆菌检测方法，并参照其他食品卫生微生物学检验和计数方法，建立起改进的蜡样芽孢杆菌检测方法，通过对该方法进行有效性和准确性验证，能够与现行的国内外检测方法达到同样的特异性和准确性，可以用于食品中蜡样芽孢杆菌的检测。与其他检测方法相比较，该改进的方法具有简便、准确、经济的特点，为食品中蜡样芽孢杆菌的检测提供新的思路。

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第一章 绪论

1.1 引言

1.2 蜡样芽孢杆菌概述

1.2.1 蜡样芽孢杆菌的生物学特性

1.2.2 蜡样芽孢杆菌在食品中的分布

1.2.3 蜡样芽孢杆菌产生的毒素与危害

1.3 蜡样芽孢杆菌检测方法概述

1.3.1 常规检测方法

1.3.2 酶反应检测方法

1.3.3 PCR技术和免疫学技术检测方法

1.4 研究目的与意义

1.5 研究的主要内容

第二章 蜡样芽孢杆菌检测方法的分析与研究

2.1 材料

2.1.1 样品采集

2.1.2 菌株

2.1.3 主要试剂

2.1.4 实验仪器与设备

2.1.5 培养基的配置

2.2 GB/T 4789.14-2003的研究

2.2.1 样品检测

2.2.2 检测结果

2.2.3 讨论与分析

2.3 SN/T 0176-2013的研究

2.3.1 样品检测

2.3.2 检测结果

2.3.3 讨论与分析

2.4 EN ISO 7932-2004的分析

2.5 使用API 50 CHB生化鉴定系统进行生化鉴定的分析

第三章 改进的蜡样芽孢杆菌检测方法的建立

3.1 方法概述

3.1.1 检测流程

3.1.2 结果计算

3.1.3 蜡样芽孢杆菌平板计数的报告

3.2 改进的蜡样芽孢杆菌检测方法有效性验证

3.3 改进的蜡样芽孢杆菌检测方法准确性验证

3.3.1 材料

3.3.2 方法

3.3.3 结果与分析

3.4 讨论

第四章 结论

参考文献

致谢

作者简介

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