鸡免疫功能相关MHCB-LβⅡ基因筛选及一定纯度中药复方多糖对其免疫调节作用研究

摘要

目的:本研究利用一定纯度的中药复方多糖，作用于MHC B-LβII基因不同基因型的鸡。通过检测鸡不同日龄各项免疫指标，探究一定纯度中药复方多糖对不同基因型鸡的免疫调节作用，确定对不同基因型鸡免疫调节作用的最佳中药复方多糖的浓度，为中药复方多糖在提高鸡免疫能力方面的研究提供理论和试验依据。
　　方法：
　　1、用水提醇沉法，对由当归、党参、熟地、川芎、山楂、何首乌等11味中药组成的中药复方进行粗多糖的提取。
　　2、利用Sevage法除去粗多糖中的蛋白质成分后，将多糖经过AB-8大孔吸附树脂吸附解吸，除去色素及小分子杂质，进行粗多糖纯化；再通过苯酚-硫酸法测定纯化后多糖含量，获得一定纯度的中药复方多糖。
　　3、经过DNA提取技术、PCR-SSCP技术和基因测序技术，对500羽黄麻肉鸡雏鸡进行DNA提取，以及基因分型。
　　4、将一定纯度的中药复方多糖，配制成高剂量(50 mg/mL)、中剂量(25 mg/mL)、低剂量(12.5 mg/mL)3种不同浓度；对不同基因型的鸡，分别进行新城疫疫苗免疫、分组、用药，采集21、42、56、70四个日龄阶段的鸡外周血，分离血清。
　　5、用ELISA方法检测21、42、56、70四个日龄阶段，鸡血清中细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IFN-α、IFN-γ)含量，新城疫抗体含量。
　　6、用ELISA方法检测21、42、56、70四个日龄阶段，鸡血清中CD4+、CD8+淋巴细胞亚群含量，IgG、IgM含量。
　　7、用MTT法检测21、42、56、70四个日龄阶段，鸡淋巴细胞转化率，红细胞凝集法检测42、56、70三个日龄阶，鸡段绵羊红细胞抗体滴度。
　　结果：
　　1、经过提取纯化后，利用苯酚-硫酸法检测，得到含量为77.10％的中药复方多糖。
　　2、根据PCR-SSCP以及基因测序结果，共分出AA、AB、BB、AC、AD五种不同基因型。
　　3、鸡各项免疫指标检测结果显示，高剂量组中，AA基因型个体的各项免疫功能相关指标均高于其他四种基因型个体；中剂量组中，AB基因型个体的各项免疫功能相关指标均高于其他四种基因型个体；低剂量组中，AB基因型个体的各项免疫功能相关指标均高于其他四种基因型个体。
　　结论：分析结果表明，MHC B-LβII基因的多态性对中药复方多糖最适免疫增强剂量的的筛选具有一定程度的影响，不同基因型鸡中药复方多糖的最佳剂量有所不同。同时，在三种不同浓度的中药多糖中，以中剂量浓度的促进作用效果最好。