五味子醇提液干预阿霉素诱导的足细胞损伤的体外研究

摘要

目的:观察五味子醇提液（schisandra chinensis fruit ethanol extract，SE）对阿霉素（adriamycin，ADR）诱导的体外足细胞损伤中足细胞裂孔膜蛋白nephrin和骨架蛋白desmin表达的影响，并探讨其保护作用机制。
　　方法:体外阿霉素作用于足细胞24h，造成足细胞明显损伤后，加入含SE的培养基，继培养24h。设对照组(培养基含0mg/L ADR)、模型组(培养基含0.25mg/L ADR)、SE干预组(培养基含250mg/L SE+0.25mg/L ADR)、SE组（培养基含250mg/L SE）。MTT比色法检测各组细胞活力;免疫荧光法测定各组nephrin及desmin的表达;Western Blot检测各组nephrin和desmin蛋白表达;RT-PCR检测各组nephrin和desmin mRNA表达。
　　结果:MTT比色法结果显示模型组细胞活力明显降低，SE干预组细胞活力较模型组增加，均有统计学意义(P＜0.05)。免疫荧光结果显示对照组和SE组nephrin呈颗粒状或线性分布于细胞膜，模型组较对照组、SE组和SE干预组表达强度明显减少;对照组与SE组足细胞desmin几乎不表达或少量表达，模型组则表达量明显增强，以颗粒状分布于细胞核，SE干预组较模型组表达量减少。模型组nephrin蛋白和mRNA表达较对照组显著减少，SE干预组nephrin蛋白和mRNA表达水平较模型组增加，模型组desmin蛋白和mRNA表达较对照组显著增加，SE干预组desmin蛋白和mRNA表达水平较模型组显著减少（均P＜0.05）。
　　结论:浓度为0.25mg/L的ADR体外作用于足细胞24h，可以诱导足细胞明显损伤;足细胞损伤后其损伤标志性分子nephrin表达显著减少，desmin表达显著增加;浓度为250mg/L的SE体外单独孵育足细胞对其无损伤作用;SE能显著上调足细胞裂孔膜蛋白nephrin，下调骨架蛋白desmin蛋白及mRNA表达;SE对损伤后的足细胞有保护作用，通过上调足细胞裂孔膜蛋白nephrin和下调骨架蛋白desmin的表达从而保护足细胞的结构和功能的完整性而发挥作用。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1．材料与方法

1．1 材料

1．1．1 足细胞

1．1．2 实验用主要试剂及其来源

1．1．3 所用抗体及其来源

1．1．4 仪器设备及其来源

1．1．5 实验用主要试剂的配制

1．2 实验方法

1．2．1 足细胞培养

1．2．2 实验分组及药物刺激

1．2．3 MTT比色法检测各组细胞活力

1．2．4 免疫荧光染色

1．2．5 Western Blot检测各组nephrin和desmin蛋白表达

1．2．6 反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测nephrin和desmin mRNA的表达

1．2．7 统计学方法

2 结果

2．1 MTT比色法检测各组细胞活力

2．2 免疫荧光结果

2．3 Western Blot结果

2．4 RT-PCR结果

3 讨论

3．1 阿霉素诱导足细胞损伤的机制

3．2 nephrin在肾小球足细胞中的表达及意义

3．3 desmin在肾小球足细胞中的表达及意义

3．4 五味子在肾脏疾病中的应用

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 足细胞及足细胞病研究进展

致谢