一种从五味子提取液中纯化五味子醇甲及五味子乙素的方法

摘要

一种从五味子提取液中纯化五味子醇甲及五味子乙素的方法，它是五味子生药经提取后，收集提取液，将提取液浓缩至生药重量的0.3-0.8倍，向浓缩液中加入体积为生药重量2-4倍的纯水，在0-4℃下冷却静置4-6h进行水沉，进行第一次高速离心分离，沉淀待处理；向上清液中加入生药重量的10-20%活性炭搅拌吸附0.5-3h后，进行第二次高速离心分离，离心上清液弃去；向活性炭中加入生药重量的4-20倍60-95%（v/v）的乙醇溶液，加热至50-80℃洗脱1-3h，进行第三次高速离心分离后收集上清液；将上清液加入到第一次离心后的沉淀中，搅拌，均质后加入生药重量的3-8%的辅料，干燥后即得到含五味子醇甲和乙素的干浸膏；本发明操作简洁，安全无毒，成本低，回收率高，能同时回收五味子醇甲和五味子乙素，具有良好的医药和保健食品开发前景。

说明书

技术领域

本发明涉及中药制备技术领域，具体是一种从五味子提取液中纯化五味子醇甲及五味子乙素的方法。

背景技术

中药五味子，为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实，习称“北五味子”，分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、山西、宁夏、甘肃、山东等地。具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心之功效。常用于久嗽虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗盗汗，津伤口渴，内热消渴，心悸失眠。

五味子中含有五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素等多种木脂素，具有良好的保肝降酶作用，常用于中药及保健食品，如葵花护肝片、五酯片、降酶灵胶囊、五酯胶囊等都含有中药材五味子。但由于五味子提取后，提取液难以浓缩干燥，同时，浸膏量达到生药量40%之多，常造成了添加了五味子的中药或保健食品制成的片剂或胶囊需要患者或顾客每日服用上十片或上十颗，如葵花护肝片需一日服用三次，每次服用四片，较大的服用量增加了厂家制作及包装成本，以及不利于患者或顾客的携带方便，因此进行五味子提取纯化工艺研究十分必要。

现有专利《一种制备五味子醇甲和五味子醇乙的新工艺》中对五味子醇甲的的纯化经由石油醚萃取、HPD大孔树脂纯化、两次硅胶柱层析（分别使用了二氯甲烷-甲醇、环己烷-乙酸乙酯洗脱）、再经石油醚-甲醇-水反复结晶，才得到相关成份，完全不具有应用于中药及保健食品生产的价值；而专利《一种五味子醇甲的提取工艺》、《一种从五味子中提取分离五味子乙素的方法》、《一种纯化五味子醇甲的新方法》等也是用到了大孔树脂及硅胶柱及重结晶等方法，虽然在纯度上高于本发明，但用于实际生产，过程复杂，运行成本较高，容易残留有毒有害物质而不具有实际应用价值，中药及保健食品并不追求功效成份过高的纯度，而对安全性有更高的要求；专利《五味子单体成分的分离制备方法》、《一种五味子中木脂素单体的提取分离制备方法》中的方法过程复杂，成本太高，则仅能用于科研，由于以上相关专利有的是只收集既溶于水也溶于醇的五味子醇甲，有的是只收集溶于乙醇，而难溶于水的五味子乙素，同时使用了大孔树脂或其他成本较高、容易混入有害成份的方法及工艺，在操作简洁性、安全性、低成本及良好的纯化效果方面均有待提高。

发明内容

本发明的目的就是要解决现行的五味子醇甲和五味子乙素的纯化方法操作复杂，成本高，容易残留有毒有害物质等问题，提供一种操作简洁，安全无毒，成本低，回收率高，且能够同时纯化五味子醇甲和五味子乙素的方法，具有良好的医药和保健食品开发前景。

本发明的一种从五味子提取液中纯化五味子醇甲及五味子乙素的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）提取：五味子生药经提取后，收集提取液；

（2）浓缩：将提取液进行浓缩，浓缩液的体积为五味子生药重量的0.3-0.8倍，向浓缩液中加入体积为五味子生药重量的2-4倍的纯水，在0-4℃下冷却静置4-6h进行水沉，将水沉处理液进行第一次离心分离，离心转速为3000-10000r/m，离心后得沉淀和上清液，90-95%的五味子乙素和50%-55%的五味子醇甲进入沉淀，5-10%的五味子乙素及45-50%的五味子醇甲留在上清液，沉淀待处理；

（3）吸附：向上清液中加入活性炭进行吸附，活性炭的加入量为五味子生药重量的10-20%，搅拌吸附0.5-3h后，进行第二次离心分离，离心转速为3000-10000r/m，离心上清液弃去，活性炭待处理；

（4）洗脱：向活性炭中加入60-95%（v/v）的乙醇溶液，加入量为五味子生药重量的4-20倍，溶液加热至50-80℃，搅拌洗脱1-3h，溶液进行第三离心分离，离心转速为3000-10000r/m，收集上清液，活性炭重复利用2-20次；

（5）回收：将上清液加入至第一次离心分离后的沉淀中，搅拌，均质，添加五味子生药重量的3-8%的辅料，干燥后即可得到含五味子醇甲和五味子乙素的干浸膏，干浸膏中的五味子醇甲的回收率大于90%，五味子乙素的回收率大于95%。

本发明中所述的提取工艺有两种：一是每次按生药重量的5-10倍加入70-95%（v/v）的乙醇水溶液，在50-90℃下回流提取2-4次，每次2-3h，收集每次的提取液；二是每次加入生药重量的5-10倍纯水，在50-90℃下回流提取1-3次，每次1-3h，弃提取液，向药渣中加入生药重量的6-10倍70-95%（v/v）的乙醇水溶液，在50-90℃下回流提取1-3次，每次1-3h，收集每次的提取液。

本发明中所述辅料为微晶纤维素、β-环糊精、淀粉、异麦芽酮糖醇、二氧化硅、80%乙醇制粒中的一种或两种。

本发明中所述辅料优选为微晶纤维素。

本发明与传统的五味子醇甲和五味子乙素的回收方法相比，具有以下几个优点：

（1）在保证五味子醇甲和五味子乙素回收率的前提下，简化了操作流程，整个过程仅使用水、乙醇和活性炭，无有毒有害成分参与，化学实际消耗少，成本低，且活性炭可以重复利用，安全无毒，回收率高；

（2）最终得到的干浸膏量少，在同等生药用量下制成的片剂或胶囊数量更少，减少了产品的服用量，具有良好的医药和保健食品前景；

（3）本发明的回收方法制得的五味子干浸膏的得率（五味子干浸膏的质量与生药重量比）为5%左右，适合中药及保健食品的制作。

附图说明

图1是本发明实施例1的工艺流程图；

图2是五味子醇甲及五味子乙素标准品的液相色谱图；

图3是本发明实施例1提取液中的五味子醇甲及五味子乙素的液相色谱图；

图4是本发明实施例1步骤（2）中的上清液中的五味子醇甲及五味子乙素的液相色谱图；

图5是本发明实施例1步骤（3）中的滤液中的五味子醇甲及五味子乙素的液相色谱图；

图6是本发明实施例1步骤（4）中的上清液中的五味子醇甲及五味子乙素的液相色谱图。

具体实施方式

实施例1

本实施例的一种从五味子提取液中纯化五味子醇甲及五味子乙素的方法，包括以下步骤：

（1）提取：向100Kg五味子生药中加入800L的纯水，在70℃下回流提取2h，过滤收集药渣，滤液弃去；向药渣中每次加入800L 90%（v/v）的乙醇水溶液，在80℃下回流提取2次，每次2h，收集每次的提取液并进行五味子醇甲和五味子乙素含量的检测，检测谱图见图3，图2为五味子醇甲和五味子乙素的标准品的谱图；

（2）浓缩：将提取液浓缩至50L，再向浓缩液中加入300L的纯水，在0-4℃下冷却后静置5h进行水沉，将水沉处理液进行第一次离心分离，离心转速为8000r/m，离心后得沉淀和上清液，90-95%的五味子乙素和50%-55%的五味子醇甲进入沉淀，5-10%的五味子乙素及45-50%的五味子醇甲留在上清液，将上清液进行五味子醇甲和五味子乙素含量的检测，检测谱图见图4，沉淀待处理；

（3）吸附：向上清液中加入活性炭15Kg进行吸附，搅拌吸附1h后进行第二次离心分离，离心转速为3000r/m，离心上清液经五味子醇甲和五味子乙素含量的检测后弃去，检测谱图见图5，活性炭待处理；

（4）洗脱：向活性炭中加入1000L 85%（v/v）的乙醇水溶液，溶液加热至60℃，搅拌洗脱2h，溶液进行第三次离心分离，离心转速为3000r/m，收集上清液进行五味子醇甲和五味子乙素含量的检测，检测谱图见图6，活性炭在步骤（3）中重复利用2-20次；

（5）回收：将上清液加入至第一次离心分离后的沉淀中，搅拌，均质，添加5Kg微晶纤维素混匀干燥后即可得到富含五味子醇甲和五味子乙素的干浸膏，干浸膏中的五味子醇甲的回收率为90.8%，五味子乙素的回收率为95.2%。

从图2-6可以看出，图2的标准谱图中，五味子醇甲的出峰时间为6.523min，五味子乙素的出峰时间为41.912min，由于五味子乙素只溶于乙醇，而五味子醇甲既溶于水也溶于乙醇，先水提再醇提后的提取液图3中五味子乙素的含量不超过1%，95%以上的五味子乙素收集在沉淀中，具有很高的回收率；图5中的滤液经活性炭吸附后，从谱图中可以看出，五味子醇甲峰消失，说明五味子醇甲吸附率很高；图6中的活性炭经乙醇溶液洗脱后得到纯度很高的五味子醇甲，说明纯化效果显著，五味子醇甲的回收率在90%以上。

实施例2

参见图1，本发明的包括以下步骤：

（1）提取：向100Kg五味子生药中每次加入500L 95%（v/v）的乙醇水溶液，在90℃下回流提取4次，每次2h，收集每次的提取液；

（2）浓缩：将提取液浓缩至80L，再向浓缩液中加入400L的纯水，在0-4℃下冷却后静置4h进行水沉，将水沉处理液进行第一次离心分离，离心转速为3000r/m，离心后得沉淀和上清液，90-95%的五味子乙素和50%-55%的五味子醇甲进入沉淀，5-10%的五味子乙素及45-50%的五味子醇甲留在上清液，沉淀待处理；

（3）吸附：向上清液中加入10Kg的活性炭进行吸附，搅拌吸附2h后进行第二次离心分离，离心转速为8000r/m，滤液弃去，活性炭待处理；

（4）洗脱：向活性炭中加入2000L 60%（v/v）的乙醇水溶液，溶液加热至50℃，搅拌洗脱3h，溶液进行第三次离心分离，离心转速为10000r/m，收集上清液，活性炭在步骤（3）中重复利用2-20次；

（5）回收：将上清液加入至第一次离心分离后的沉淀中，搅拌，均质，添加4Kg异麦芽酮糖醇和4Kg二氧化硅，混匀干燥后即可得到富含五味子醇甲和五味子乙素的干浸膏，干浸膏中的五味子醇甲的回收率为92%，五味子乙素的回收率大于96.8%。

实施例3

参见图1，本发明包括以下步骤：

（1）提取：向100Kg五味子生药中每次加入1000L 70%（v/v）的乙醇水溶液，在50℃下回流提取2次，每次3h，收集每次的提取液；

（2）浓缩：将提取液浓缩至30L，再向浓缩液中加入200L的纯水，在0-4℃下冷却后静置6h进行水沉，将水沉处理液进行第一次离心分离，离心转速为10000r/m，离心后得沉淀和上清液，90-95%的五味子乙素和50%-55%的五味子醇甲进入沉淀，5-10%的五味子乙素及45-50%的五味子醇甲留在上清液，沉淀待处理；

（3）吸附：向上清液中加入20Kg活性炭进行吸附，搅拌吸附3h后进行第二次离心分离，离心转速为10000r/m，滤液弃去，活性炭待处理；

（4）洗脱：向活性炭中加入400L 95%（v/v）的乙醇水溶液，溶液加热至80℃，搅拌洗脱1h，溶液进行第三次离心分离，离心转速为8000r/m，收集上清液，活性炭在步骤（3）中重复利用2-20次；

（5）回收：将上清液加入至第一次离心分离后的沉淀中，搅拌，均质，添加1Kg β-环糊精和2Kg淀粉，混匀干燥后即可得到富含五味子醇甲和五味子乙素的干浸膏，干浸膏中的五味子醇甲的回收率为93%，五味子乙素的回收率大于97.2%。

将本发明实施例1-3与传统提纯方法在干浸膏量、干浸膏得率以及五味子醇甲和五味子乙素的在浸膏中的含量进行比较，具体试验数据见下表。

从上表可以看出，本发明实施例1-3与传统纯化工艺比较，浸膏量大幅降低，由传统工艺的40-45Kg降低至5.08Kg，增加了辅料空间，降低了生产成本，等同剂量下服用片剂或胶囊减少。同时五味子醇甲在浸膏中的含量由传统工艺的0.445%提高到3.522%，提高了691%；五味子乙素在浸膏中的含量由传统工艺的0.352%提高到2.947%左右，提高了737%，由此可见，本发明的纯化效果显著。