靶向VEGF基因siRNA对放射性核素杀伤肿瘤的增强作用

摘要

目的：建立特异性靶向VEGF基因的表达siRNA质粒，在肿瘤细胞内诱导RNA干扰，抑制VEGF表达，观察siRNA对放射性核素杀伤肿瘤的增强作用，探索肿瘤治疗的新途径。 结论：针对人VEGF mRNA干扰质粒载体构建成功，在肿瘤细胞内诱导RNAi现象有效地抑制转染细胞VEGF表达；siRNA可以增强放射性核素对肿瘤细胞的杀伤作用，其机制可能与siRNA抑制VEGF表达，增加肿瘤细胞凋亡以及内皮细胞对放射线敏感性增加有关；利用RNA干扰技术抑制VEGF表达可作为肿瘤放射治疗中辅助治疗，以增加疗效。

目录

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第一章前言

1.1 VEGF与肿瘤的生长

1.2 VEGF与肿瘤的放射治疗

1.3抗VEGF策略

1.4 RNA干扰

1.4.1 RNAi的机制

1.4.2 RNAi的特点

1.5 siRNA的合成

1.6课题的立题方向

第二章材料与方法

2.1材料

2.1.1主要试剂及检测试剂盒

2.1.2培养基及常用溶液配制

2.1.3主要实验仪器

2.1.4细胞系及培养基

2.2方法

2.2.1靶向VEGF基因的特异性siRNA序列的设计

2.2.2 siRNA载体构建

2.2.3细胞培养及siRNA转染

2.2.4放射性核素及照射条件

2.2.5肿瘤细胞VEGF mRNA表达检测：RT-PCR法

2.2.6肿瘤细胞VEGF蛋白表达检测：Westernblot法

2.2.7肿瘤细胞培养上清VEGF蛋白表达检测：ELISA法

2.2.8克隆形成试验

2.2.9 HUVECs MTT分析

2.2.10流式凋亡检测

第三章结果

3.1 siRNA载体构建

3.2质粒转染及稳定转染细胞株建立

3.3 siRNA对肿瘤细胞内源性VEGF表达的抑制作用

3.3.1 RT-PCR分析

3.3.2 Western blot分析

3.3.3 ELISA检测

3.4 siRNA增强放射性核素对肿瘤细胞的杀伤作用

3.4.1射线诱导肿瘤细胞VEGF表达以及siRNA对此的抑制作用

3.4.2流式凋亡检测

3.4.3克隆形成试验

3.5 HUVECs MTT分析

第四章讨论

4.1 32P胶体在肿瘤治疗中的应用

4.2抗VEGF治疗提高放射治疗敏感性

4.3 RNAi与肿瘤基因治疗中的应用

4.4存在的问题

4.5展望

第五章结论

参考文献

综述一 靶向血管内皮生长因子RNA干涉技术在治疗肿瘤中的应用

综述二 肿瘤反基因放射治疗的研究进展

攻读学位期间已发表论文

致谢