灵芝子实体多糖的分离纯化、结构解析及免疫活性研究

摘要

灵芝（Ganoderma lucidum）为多孔菌科的担子菌，在中国已有2000多年的民间药用史，主要用于治疗肝炎、慢性气管炎、哮喘、心绞痛、高血压、神经衰弱和肿瘤等疾病。近年来，关于灵芝提取物的研究已在全世界范围展开，多糖作为灵芝中主要的有效成分之一，受到了越来越多的关注。研究证明，灵芝多糖具有增强免疫功能、抑制肿瘤、降血糖、延缓衰老等作用。由于目前对灵芝均一多糖组分的详细化学结构报道较少，为系统地研究灵芝多糖的化学结构和生物活性，本文对灵芝子实体多糖组分进行了分离纯化、结构解析及免疫活性研究。 本论文共有三个部分，分别从多糖的脱色工艺、分离纯化和理化性质、结构分析和免疫活性等方面进行了研究。主要结果如下： 1灵芝子实体多糖的分离纯化及理化性质研究119＃灵芝子实体经醇脱脂，热水浸提后超滤分级得到四个组分GLPA、GLPB、GLPC和GLPD。 通过单因素试验和正交试验，筛选出适宜GLPA脱色的工作条件为：AB-8树脂、pn=4.0、T＝60℃，在此条件下多糖脱色率可达87.38％，多糖保留率为89.24％，蛋白质去除率为77.11％。 利用阴离子柱交换层析（DEAE-SepharoseFF）和凝胶柱层析（SephacrylS300）对GLPB进行了分离纯化，得到两个均一多糖，用高效液相色谱法、苯酚-硫酸法和BCA法对其分子量、总糖含量和蛋白含量进行鉴定，结果如下： GLPBW1-1和GLPBS1-1-a为白色絮状样品，且均易溶于水、二甲基亚砜，难溶于乙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂。 2灵芝子实体多糖结构的初步研究通过红外光谱分析、单糖组成分析、甲基化分析和核磁共振（一维：1HNMR谱、13CNMR谱；二维：1H-1HCOSY谱、TOCSY谱、NOESY谱、HMQC谱和HMBC谱）技术，研究了GLPBS1-1-a的化学结构。 单糖组成分析结果表明GLPBS1-1-a含有岩藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖，以1：4.5：1.6：0.9组成。甲基化分析结果表明，岩藻糖以端基方式连接，半乳糖主要以1，6-和1，2，6-两种方式连接，还有一些其它的连接型式单糖残基存在，三个主要残基的摩尔比约为1：4：1。由NMR进一步分析结果表明GLPBS1-1-a存在以下结构重复单元： 3灵芝子实体多糖的体外免疫活性研究GLPA及脱色后的GLPAT对小鼠脾淋巴细胞均无明显刺激增殖作用；GLPB经阴离子柱交换层析分离后，所得各组份GLPBW、GLPBS1和GLPBS2均有较高的刺激小鼠脾淋巴细胞增殖作用，水相组分GLPBW增殖作用高于盐相组分GLPBS1和GLPBS2；GLPBW和GLPBS1经阴离子柱交换层析和凝胶柱层析纯化后，各组分均具有明显的刺激小鼠脾淋巴细胞增殖作用，且部分有剂量依赖性关系；但发现纯化后的组分活性较上一级组分活性低。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章引言

1 灵芝的化学成分研究

1.1 灵芝多糖

1.2 三萜类化合物

1.3 核苷类

1.4 氨基酸多肽类

1.5 甾醇类

1.6 生物碱类

1.7 其他有效化学成分

2 灵芝多糖的药理作用研究

2.1 免疫调节作用

2.2 抗肿瘤作用

2.3 抗衰老作用

2.4 降血糖作用

2.5 其他作用

3 灵芝多糖的化学研究

3.1 灵芝多糖的提取分离纯化

3.2 多糖的检测

3.3 多糖的结构解析

4 本课题研究的目的意义及主要内容

4.1 研究目的与意义

4.2 研究内容

第二章灵芝子实体多糖的分离纯化及理化性质研究

第一节灵芝子实体多糖的提取

1 材料和方法

2 结果与分析

第二节GLPA的树脂多色工艺研究

1 材料与方法

2 结果与分析

第三节灵芝子实体多糖的分离纯化

1 材料与方法

2 结果与分析

第四节本章小结

第三章灵芝子实体多糖的结构初步研究

1 材料和方法

1.1 材料

1.2 试剂

1.3 紫外扫描

1.4 单糖组成分析

1.5 红外光谱分析

1.6 甲基化分析

1.7 核磁共振分析

2 结果与分析

2.1 样品的紫外分析

2.2 单糖的组成分析

2.3 样品的红外光谱分析

2.4 甲基化分析

2.5 NMR分析

3 本章小结

第四章灵芝子实体多糖的体外免疫活性研究

1 材料和方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果与分析

2.1 灵芝子实体粗多糖对淋巴细胞的刺激增殖的结果

2.2 灵芝子实体均一多糖对淋巴细胞的刺激增殖的结果

3 本章小结

全文讨论

全文总结

本论文创新点、不足与展望

参考文献

附录

致谢

论文发表与参加会议