骨髓间充质干细胞在小鼠异基因骨髓移植中免疫调节作用的初步研究

摘要

骨髓间充质干细胞(MSC)是骨髓中能分化为成骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞,具有多向分化的前体细胞.在对NOD/SCID小鼠的一些研究中显示,移植时共输注MSC能增强人造血细胞在NOD/SCID小鼠骨髓中的植入.MSC能产生许多促进造血细胞归巢或增殖和分化的细胞因子,因此在促进造血恢复中发挥重要的作用.而且,MSC是弱的抗原提呈细胞,不表达MHCⅡ类分子或共刺激分子.通过MSC能够在体外抑制混合淋巴细胞反应(MLR)的实验结果说明,MSC也具有免疫调节的特性.在狒狒皮肤移植物排斥模型中,与无MSC输注的控制组相比,体内共输注MSC组狒狒的皮肤移植物生存时间延长了.该实验的研究目的是初步探讨小鼠MSC在小鼠异基因骨髓移植中的免疫调节作用.首先分离、培养并通过流式细胞仪和细胞组织化学来鉴定小鼠MSC;通过输注不同的供鼠脾细胞建立了小鼠GVHD模型;最后,我们观察了小鼠MSC共输注对小鼠GVHD的免疫调节作用.结果表明,分离、扩增培养至第四代之后的MSC细胞形态均一,高表达Sca-1,CD29,CD44和CD105,而几乎不表达CD34和CD45等造血与内皮细胞特异性表面标志;在特殊的诱导体系中小鼠MSC可向脂肪细胞和成骨细胞分化.给予5×10<'6>个以上的供者脾细胞均能诱导出典型的急性GVHD,但输注脾细胞数高的小鼠出现GVHD的时间早且症状重.受鼠MSC(5×10<'4>)与供鼠脾细胞(5×10<'6>)共输注组或供者MSC(1×10<'6>)与供鼠脾细胞(5×10<'7>)共输注组的小鼠生存时间与对照组均无明显差异,但GVHD表现更严重.我们的结论是:①采用骨髓细胞与骨碎片共培养能够成功地分离及培养出小鼠MSC;②建立了小鼠异基因骨髓移植的GVHD模型;③培养扩增的小鼠MSC与造血细胞共输注加重了GVHD的程度,可能与MSC输注的数量少和归巢能力差有关,说明MSC的免疫调节功能在体内可能受到许多因素的影响,仍需进一步深入研究.

目录

缩略词对照表

Abstract

前言

第一部分小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定

实验设计

材料和方法

结果

讨论

第二部分异基因骨髓移植小鼠GVHD模型的建立

材料和方法

结果

讨论

第三部分骨髓间充质干细胞在小鼠异基因骨髓移植中免疫调节作用的初步研究

实验设计

材料和方法

结果

讨论

总 结

参考文献

文献综述

致 谢