一个新的抗EGFR抗体的确认及机制研究

摘要

EGFR家族成员的功能异常是肿瘤发生过程中的一个关键步骤。抗EGFR治疗药物，例如西妥昔单抗，已经在临床上被广泛应用于治疗EGFR阳性的肿瘤。但是，为何抗EGFR治疗能够达到良好的治疗效果，其潜在的作用机制仍旧没有完全被阐述清楚。在本文中，通过噬菌体表面展示技术，筛选得到了400株抗EGFR胞外区的单链抗体，其中一株，名为YAH627，在体外肿瘤细胞生长抑制模型中显示了最强的抗肿瘤活性，其效果甚至强于西妥昔单抗。使用表位淘选技术，发现YAH627能够结合到EGFR分子上DomainⅡ和DomainⅣ区域，名为YAH627，该抗体对EGFR有极强的亲和力和特异性。更有意思的是，尽管YAH627并不占据EGFR受体上DomainⅠ和DomainⅢ的EGF结合位点，但抗体的存在仍旧能够非常显著的降低EGF和受体的结合。随后，通过免疫共沉淀技术，发现识别EGFR分子domainⅡ/Ⅳ区域的抗体YAH627不仅能够阻碍配体的结合，还能够抑制受体分子间的二聚化，因此具有强于西妥昔的治疗效果。
　　在EGFR同源二聚体结构中，Y246和Y251残基和R285，F263残基相互作用。在本文中，发现Y246和Y251残基落在YAH627的识别表位中。为了验证这一猜测，通过PCR技术将EGFR分子上这些位点突变为丙氨酸，并观察到这个突变对EGFR/HER3分子的异源二聚化有非常大的影响。因此，突变数据说明EGFR/HER3的异二聚化同样依赖于EGFR二聚化臂区域正确的接触。从细胞信号通路和肿瘤增殖方面的实验显示用西妥昔去阻止配体的结合并不比YAH627更有效。这可能是因为YAH627能够改变EGFR的构象，在阻止受体分子二聚化的同时，能够降低受体分子和配体的亲和力。
　　综上所述，通过噬菌体表面展示技术，筛选得到了一株抗EGFR单抗，克隆号YAH627，他能够抑制EGFR和HER3分子之间的异源二聚化。同时，YAH627和EGFR的结合还能够改变EGFR的构象，抑制EGF和EGFR的结合。因此具有强效的肿瘤抑制作用，特别是YAH627和西妥昔单抗联合使用时，具有远远超过单个抗体的治疗效果。因此，该抗体是一个潜在的抗癌临床药物。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分 EGFR抗体筛选及鉴定

(一)材料

(二)方法

(三)结果

(四)讨论

第二部分 新型抗EGFR胞外段抗体的机制研究

(一)材料

(二)方法

(三)结果

(四)讨论

第三部分 YAH627的体内外抑瘤能力评价

(一)材料

(二)方法

(三)结果

(三)讨论

全文小结

参考文献

综述 EGFR相关肿瘤靶向治疗研究进展

在读期间发表论文和参加科研工作情况说明

致谢