整合素连接激酶ILK在卵巢上皮性肿瘤中的表达及对卵巢癌细胞侵袭能力的影响

摘要

整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)是一种新发现的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在多种恶性肿瘤中高表达，抑制ILK 的活性能够导致细胞周期的停滞和细胞凋亡的启动。转移是恶性肿瘤最重要的生物学行为，近几年研究发现，生长因子的细胞内信号转导通路同肿瘤转移密切相关，其中磷脂酰肌醇-3-羟基激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)信号转导通路在肿瘤转移中扮演了重要的角色。 近年来研究表明，ILK 活性有赖于PI3K 的活化，PI3K 的作用可被特异性抑制剂完全阻断，进而影响ILK 的激活，使其对下游信号分子磷酸化作用受抑，最终引起细胞信号传导通路受阻，影响了肿瘤的侵袭转移。国内目前关于ILK 在卵巢癌的表达及其在卵巢癌侵袭转移中的作用尚未见报道。我们设想ILK 可能与卵巢癌的发生进展及侵袭转移相关，抑制ILK 的活性有可能抑制卵巢肿瘤的侵袭，使其成为卵巢肿瘤基因治疗的理想靶点。 目的： 1、探讨整合素连接激酶（ILK）在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其临床意义。 2、研究PI3K/AKT 传导通路的特异性抑制剂LY294002 对卵巢上皮癌细胞株HO8910PM 和HO8910 中ILK 的表达水平及对癌细胞侵袭能力的抑制作用，初步探讨可能的作用机制。 方法： 1、采用免疫组化sp 法检测卵巢上皮性肿瘤组织中整合素连接激酶的表达。 2、免疫细胞化学法和Western Blot 检测用LY294002 处理前后，HO8910PM 和HO8910 细胞株中ILK 蛋白表达水平的变化。 3、RT-PCR 方法测定LY294002 处理前后，HO8910PM 和HO8910 细胞株中ILK mRNA 的水平变化。 4、MTT 法检测LY294002 对肿瘤细胞生长的影响。 5、细胞-基质粘附试验检测LY294002 作用前后，肿瘤细胞粘附能力的改变。 6、Transwell 小室法观察LY294002 作用前后，HO8910PM 和HO8910 细胞侵袭能力的变化。 结果： 1、ILK 在恶性肿瘤中的表达明显高于良性肿瘤和交界性肿瘤(P<0.05)；在卵巢癌中的表达临床Ⅰ～Ⅱ期均明显低于Ⅲ～Ⅳ期，(P<0.05),高中分化、无淋巴结转移组均显著低于低分化及有淋巴结转移组(P<0.05)。 2、LY294002 可以显著抑制ILK 蛋白在HO8910PM 和HO8910 细胞株中的表达（P<0.05），其抑制效果在一定作用时间内与LY294002 呈现浓度依赖性关系，随着LY294002 的浓度增加，表达水平逐渐下降。ILK 蛋白在HO8910PM 中比在HO8910 中表达水平增高，LY294002 对HO8910PM 的作用更为明显。 3、LY294002 可以显著抑制ILK mRNA 在HO8910PM 和HO8910 细胞株中的表达（P<0.05），随LY294002 浓度增加，ILK mRNA 表达水平逐渐下降。 4、LY294002能明显抑制HO8910PM 组与HO8910 组细胞的生长。 5、LY294002 增强细胞与基质的粘附能力，其作用有显著性差异（P<0.05）。 6、处理组与对照组相比，穿过微孔滤膜的细胞数明显减少，有显著性差异（P<0.05）。HO8910PM 组与HO8910 组相比，细胞侵袭能力明显增强（P<0.05）。 结论： 1、ILK 参与肿瘤的侵袭转移过程，在卵巢癌的恶性进展中起重要作用,可以作为细胞转移的新的生物学标记。 2、ILK 高表达的肿瘤细胞对基底膜的粘附减弱，侵袭转移能力增强，这可能是通过PI3K/AKT 信号转导途径激活而发挥作用。 3、特异性抑制剂LY294002 能抑制ILK 的表达，从而起到抑制肿瘤细胞侵袭、促进粘附的作用，且其抑制作用随作用浓度的增大而明显增加。