阻断丝裂原活化蛋白激酶信号通路对卵巢癌细胞增殖、侵袭能力的影响

摘要

目的：探讨阻断丝裂原活化蛋白激酶信号通路对卵巢癌细胞增殖、侵袭能力的影响。rn 方法：先进行细胞培养，在进行CCK-8增殖实验，紧接着进行Western blot法检测蛋白表达水平，最后进行Transwell细胞侵袭迁移实验，对数据进行统计学处理。rn 结果：1.不同浓度PD98059对SKOV3,OVCAR3巢癌细胞增殖的影响，用不同浓度PD98059分别处理SKOV3,OVCAR3细胞12h,24h,48h,72h。可见SKOV3细胞增殖活性(OD值)在24h,48h,72h作用时间点，在25,50,100μmol/L作用浓度点，相同作用时间随着PD98059处理浓度的增高，相同PD98059作用浓度随着时间延长，PD98059对SKOV3细胞抑制增殖作用逐渐增强，实验组与空白对照组、阴性对照组比较，组间比较，差异有统计学意义(P<0.05);OVCAR3细胞增殖活性(OD值)在48h,72h作用时间点，在25,50,100μmol/L作用浓度点，相同作用时间随着PD98059处理浓度的增高，相同PA98059作用浓度随着时间延长，PD98059对OVCAR3细胞抑制增殖作用逐渐增强，实验组与空白对照组、阴性对照组比较，组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。2.PD98059对于ERK1/2活化的影响，Western blot实验采用25μmol/LPD98059作用SKOV3,OVCAR3细胞不同时间(Omin,15min,30min,60min)。观察PD98059对两种细胞内P-ERK1/2和ERK1/2蛋白表达水平的影响。以ERK1/2磷酸化程度作为衡量信号传导通路的活性指标。读取各组蛋白的灰度值，以P-ERK/ERK灰度比值进行P-ERK1/2,ERK1/2蛋白表达水平的相对半定量分析。显示随着时间延长P-ERK1/2蛋白表达受抑制呈上升趋势。组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，而ERK1/2蛋白表达浓度变化不明显，组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.PD98059对卵巢癌细胞SKOV3,OVCAR3侵袭能力的影响，不同浓度PD98059(0,25,50,100μmol/L)处理SK-OV3,OVCAR3细胞24h，可见两种卵巢癌细胞侵润均受到限制，SKOV3细胞在不同浓度PD98059处理后，侵润细胞数平均为23.1±4.64007个，12.4±3.34741个，6.3±1.67153个，与对照组侵润细胞平均数31.7±6.25478个比较，差异显著(P<0.05)，组间比较差异有显著性(P<0.05 );OVCAR3细胞在不同浓度PD98059处理后，侵润细胞数平均为27.8±5.34629个，16.5±4.48924个，8.7±2.35821个，与对照组侵润细胞平均数40.3±6.89735个比较，差异显著(P<0.05 )，组间比较差异有显著性(P<0.05)。rn 结论：目前，对于卵巢癌的病因及发病机制仍不明确，但其增殖和转移是造成患者死亡的重要原因，综合以上研究，表明PD98059通过抑制ERK1/2的磷酸化表达来抑制卵巢癌SKOV3及OVCAR3细胞的增殖及侵袭，证实ERKl/2通路可以作为治疗卵巢癌的新靶点，如何降低抑制剂的毒性以及在其他癌细胞中是否同样具有作用，有待进一步研究证实。