siRNA对WT1基因表达的抑制作用

摘要

目的：研究siRNA对WT1基因表达的抑制作用，探讨以WT1基因为靶标治疗白血病的可行性。 方法：化学合成特异性WT1siRNA3条，转染k562细胞系和HEK293细胞系，采用荧光定量RT-PCR方法检测WT1基因mRNA表达，Westernblot法检测WT1蛋白表达。 结果：①脂质体转染试剂对悬浮培养的k562细胞转染效率较低。②不同位点的siRNA对WT1基因抑制作用不同。si-wt1-1对WT1mRNA抑制明显(P＜0.05)，si-wt1-2、si-wt1-3对WT1mRNA无抑制(P＞0.05)③siRNA作用无明显剂量依赖性。不同浓度si-wt1-1对WT1mRNA抑制比较无统计学意义(P＞0.05)④100nmol/Lsi-wt1-1能使WT1mRNA的表达在转染后24和48小时分别降低至对照组的(42.5±1.0)％(P＜0.05)、(25.3±1.5)％(P＜0.01)，但72小时恢复至对照组水平。⑤Westernblot法检测转染阳性对照si-GAPDH72小时，蛋白表达抑制明显。转染WT1siRNA48、72、96小时后，si-wt1-1对WT1蛋白抑制明显(P＜0.05)，且96h抑制作用最强；si-wt1-2、si-wt1-3无明显抑制作用(P＞0.05)。 结论：(1)siRNA的抑制效率与WT1基因的设计位点密切相关；si-wt1-1抑制效果较好，转录水平抑制大于75％。(2)在60-120nmol/L的浓度范围内，siRNA的抑制效果与剂量无明显相关性。(3)化学合成siRNA作用时间有限，转后48h抑制效果最佳，72h后沉默作用消失。

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综述RNA干扰在白血病基因治疗中的研究进展

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