靶向C区基因的M1GS RNA核酶胞内抗乙型肝炎病毒的实验研究

摘要

目的：探讨靶向作用于乙型肝炎病毒C区基因的M1GS RNA核酶胞内抗乙型肝炎病毒的作用。 方法：通过扩增、提取及酶切鉴定表达M1GS RNA核酶的真核表达质粒pEGFP-GS和对照空质粒pEGFP-C1；制备转染用表达质粒。应用脂质体Lipofectamine TM 2000将表达载体转染进HepG2.2.15细胞内，以ELISA法检测细胞培养液中病毒抗原，以逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测细胞内病毒mRNA，以荧光定量PCR法检测分泌入培养液的HBV DNA含量，用MTT法检测核酶对细胞增殖活性的影响。 结果：质粒载体表达的M1GS RNA核酶能明显抑制细胞培养液中HBeAg的表达及病毒mRNA的表达，抑制率分别为31.58％，32.5％。但M1GS RNA核酶对培养液中的HBV DNA含量无明显影响，亦不影响HepG2.2.15细胞的增殖活性。 结论：M1GS RNA核酶能特异性抑制HepG2.2.15细胞内HBV C区基因表达，是一种很有潜力的抗HBV基因治疗方法。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一章材料与方法

1.1主要材料和仪器

1.2试剂配制

1.3实验方法

1.3.1重组质粒的扩增、提取和酶切鉴定

1.3.2转染用表达载体的制备

1.3.3细胞培养与转染

1.3.4酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养液中HBsAg和HBeAg的含量

1.3.5总RNA的抽提、定量及RT-PCR实验分析HBV C mRNA的水平

1.3.6实时荧光定量PCR法检测培养液中HBV DNA的含量

1.3.7 MTT实验测定核酶对细胞增殖活性的影响

第二章结果

2.1重组质粒pEGFP-GS的酶切鉴定结果

2.2转染用质粒的浓度和纯度

2.3脂质体介导的肝癌细胞转染

2.4 M1GS RNA核酶对HBsAg和HBeAg表达的抑制作用

2.5 M1GS RNA核酶对HBV C mRNA表达的影响

2.6 M1GS RNA核酶对HBV DNA水平的影响

2.7核酶对细胞增殖活性的影响

第三章讨论

第四章结论

参考文献

综述 核酶RNase P研究概况

攻读学位期间的研究成果

致谢