肌醇六磷酸对人结肠癌细胞系HT-29细胞分化的影响及作用机制的探讨

摘要

目的：不同浓度的IP6作用于人结肠癌细胞系HT-29，观察IP6对癌细胞分化的影响，并对其机制进行探讨。 方法：将不同浓度的IP6(对照组，1.8mM，3.3mM)作用HT-29细胞不同时间(1d,3d,5d)，分别进行如下研究： 1、使用透射电镜观察IP6对HT-29细胞超微形态的影响。 2、IP6作用3d后，使用流式细胞仪分析各组细胞周期。 3、应用RT-PCR法检测IP6对HT-29细胞内c-Myc mRNA表达的影响。 4、使用免疫细胞化学法检测IP6对HT-29细胞内Rb、c-Myc蛋白表达的影响。 5、测定碱性磷酸酶比活性。 结果： 1、3.3mM IP6持续作用后，透射电镜下可以观察到细胞结构发生改变，出现核固缩、细胞器丰富、微绒毛增多等分化趋势。 2、IP6对HT-29细胞细胞周期有明显的阻滞作用，并呈剂量依赖关系。流式细胞仪分析，G0/G1期细胞明显增多，S期、G2/M期细胞则相应减少。 3、RT-PCR和免疫细胞化学实验结果显示，与对照组相比，各浓度IP6均能使细胞内e-Myc mRNA和蛋白的表达减少(P＜0.05)。 4、免疫细胞化学实验结果表明，IP6能够上调Rb蛋白的表达(P＜0.05)。 5、IP6作用HT-29细胞后，碱性磷酸酶比活性明显增强。 结论：IP6能够促使HT-29细胞向正常细胞转化。IP6可能通过上调Rb蛋白的表达，下调c-Mye蛋白的表达，阻滞细胞周期，诱导细胞分化而发挥其抗肿瘤作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一章实验材料与方法

1.1主要试剂

1.2人结肠癌细胞系HT-29

1.3实验仪器

1.4 IP6的制备

1.5人结肠癌细胞系HT-29细胞培养方法

1.6倒置显微镜观察IP6对HT-29细胞形态的影响

1.7透射电镜观察IP6对HT-29细胞形态的影响

1.8流式细胞仪分析细胞周期

1.9 RT-PCR法检测IP6对HT-29细胞内c-Myc mRNA表达的影响

1.10免疫细胞化学法检测IP6对HT-29细胞内Rb、c-Myc蛋白表达的影响

1.11碱性磷酸酶比活性测定

1.12统计学方法

第二章结果

2.1倒置显微镜观察不同浓度IP6对人结肠癌系HT-29形态的影响

2.2透射电镜观察IP6作用后HT-29细胞超微结构的变化

2.3 IP6对HT-29细胞周期分布的影响

2.4 RT-PCR法检测IP6对HT-29细胞内c-Myc mRNA表达的影响

2.5细胞免疫组化法检测细胞内c-Myc蛋白的表达

2.6细胞免疫组化法检测细胞内Rb蛋白的表达

2.7碱性磷酸酶(ALP)比活性测定

第三章讨论

结论

参考文献

综述 肌醇六磷酸抗肿瘤研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢