肌醇六磷酸对人结肠癌细胞系HT-29细胞周期的影响及机制探讨

摘要

目的：用不同浓度的IP6作用于人结肠癌细胞系HT-29，观察IP6对癌细胞周期的影响并进行作用机制探讨，为研究IP6的抗癌机制提供理论基础。 方法：将不同浓度的IP6(0mM，1.8mM,3.3mM,5.0mM，8.0mM,13.0mM，)作用于HT-29细胞，分别进行如下研究：1、应用四甲基偶氮唑蓝实验(MTT法)分别观察IP6持续作用与间断作用对癌细胞增殖的影响；2、流式细胞仪检测不同浓度lP6作用的HT-29细胞的细胞周期变化；3、RT-PCR法检测IP6对HT-29细胞内cyclinD1、CDK4mRNA表达的影响；4、应用免疫细胞化学法检测IP6对HT-29细胞内细胞增殖相关基因PCNA、突变型p53蛋白、细胞周期抑制蛋白p21表达的影响 结果：1、不同浓度IP6持续作用对人结肠癌细胞株HT-29的生长抑制作用结果表明，与对照组相比，各浓度组OD值随IP6浓度的增加、作用时间的延长均显著降低(P＜0.05)，显示IP6持续作用对结肠癌细胞株的生长具有抑制作用，且具有浓度依赖和时间依赖关系；不同浓度IP6间断作用对人结肠癌细胞系HT-29生长的增殖抑制作用的实验结果显示，在不同作用时间5种浓度IP6作用组的OD值普遍小于对照组(P＜0.05)，但仅在每2天作用24小时的结果显示出各IP6作用组之间的浓度依赖关系。2、流式细胞仪检测不同浓度IP6作用对HT-29细胞周期的影响结果显示，与对照组相比，各IP6浓度组在48小时、72小时两个时间点，随着IP6浓度的增高、作用时间的延长，G0-G1期细胞明显增加(P＜0.01)，而s期、G2/M期细胞明显降低(P＜0.01)，表现出浓度、时间依赖关系。3、RT-PCR实验结果显示，与对照组相比，各浓度组均使cyclinD1、CDK4mRNA表达不同程度降低。4、免疫细胞化学实验结果显示，与对照组相比，各IP6浓度组均能抑制突变型p53蛋白的表达(P＜0.05)，上调p21蛋白的表达(P＜0.05)。各IP6作用组均表现出HT-29细胞PCNA的表达降低(P＜0.05)，作用强弱不同，其中3.3～5.0mM浓度组的OD值随时间延长而降低(P＜0.05)。 结论：IP6对人结肠癌细胞系HT-29细胞周期有G1期阻滞作用，阻止细胞由G1-S期的转化，并具有浓度、时间依赖关系。其影响细胞周期的作用机制可能为：IP6降低突变型p53蛋白并促进野生型p53的表达，刺激细胞周期抑制蛋白p21的表达；p21竞争性结合cyclinD1/CDK4，抑制CDK4活性，使E2F活性降低，抑制DNA的合成，从而阻止细胞进入S期；p21还可与PCNA结合，形成p21-PCNA复合物，使细胞周期G1期阻滞，而发挥抑制癌细胞增殖作用。

目录

文摘

英文文摘

前言

1实验材料与方法

2结果

3.讨论

4.结论

参考文献

综述 肌醇六磷酸防治肿瘤的研究进展

致谢

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