CD59-CD2融合蛋白真核表达载体的构建及对T细胞信号转导的作用研究

摘要

目的：构建CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体并在Jurkat细胞中稳定表达，研究CD59与CD2分子在T细胞信号转导中的相互作用，探讨CD59向T细胞内传递信号的相关机制。
　　 方法：从人T细胞白血病细胞系Jurkat细胞中提取总RNA，利用RT-PCR法扩增CD59和CD2基因，分别构建CD59-T和CD2-T重组克隆载体，经限制性核酸内切酶酶切后与pIRES质粒进行重组，构建pIRES-CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体；脂质体法转染Jurkat细胞，G418筛选建立稳定转染细胞系，免疫酶法检测转染细胞表面CD59的表达，RT-PCR检测转染细胞中CD59 mRNA表达量的变化，Western Blot检测转染细胞中CD59蛋白的表达；用CD59单克隆抗体作用于各组Jurkat细胞，Western Blot检测细胞内的ZAP70磷酸化的水平，ELISA检测细胞上清中IL-2的变化，比较各组差异。
　　 结果：经限制性核酸内切酶酶切、PCR和测序鉴定表明携带CD59-linker-CD2融合基因的重组质粒构建成功；免疫酶法和RT-PCR试验证实CD59在转染细胞L-Jurkat中高表达，Western Blot表明L-Jurkat细胞比正常Jurkat细胞CD59蛋白表达量增加，二者比较其差别有统计学意义(P<0.05)；与正常细胞相比，磷酸化的ZAP70和IL-2在转染细胞中均高表达，二者比较其差别有统计学意义(P<0.05)。
　　 结论：pIRES-CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体可在Jurkat细胞中稳定表达，CD59mAb交联后，CD59可通过CD2的胞内段向T细胞内传递信号，引起细胞内信号分子的一系列变化，为研究CD59与CD2在T细胞信号转导中的协同作用及进一步探讨CD59此类锚固蛋白向T细胞内传递信号的机制奠定基础。