牛蒡子苷元对ConA诱导小鼠急性肝损伤的保护作用研究

摘要

目的：建立刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠急性肝损伤模型，观察用牛蒡子苷元（ATG）在不同给药时间对肝损伤的影响；探讨ATG对ConA诱导的急性肝损伤的保护作用，并初步探讨其保护作用及机制。 方法：将C57BL/6小鼠随机分成3组：DMSO对照组、ConA/DMSO模型组、ConA/ATG实验组，每组7只。DMSO对照组和ConA/DMSO模型组小鼠腹腔注射DMSO，ConA/ATG实验组小鼠腹腔注射等体积的ATG（30mg/kg体重），5小时后ConA/DMSO模型组和ConA/ATG实验组小鼠尾静脉注射ConA（20mg/kg体重），于0h、2h、6h和12h等不同时间点将小鼠处死，收集肝脏组织和血清样本。（1）检测血清谷丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性；（2）HE检测肝组织病理损伤情况；（3）观察ATG对致死剂量ConA（25mg/kg体重）诱导肝损伤的存活时间影响；（4）ELISA检测血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）和白介素-12（IL-12）的含量；（5）RT-PCR检测肝组织中TNF-α、IFN-γ、Bax和Bcl-2mRNA表达水平；（6）TUNEL染色检测肝细胞凋亡情况；（7）流式细胞术检测肝脏和脾脏中淋巴细胞浸润情况；（8）检测肝脏匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和髓过氧化物酶（MPO）的表达水平。 结果：（1）与ConA/DMSO组比较，ATG预处理组血清ALT和AST水平在6h和12h明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）；（2）与ConA/DMSO组比较，ATG预处理组肝脏组织损伤程度明显减轻，损伤区域明显减少；（3）与ConA/DMSO组比较，ATG预处理组明显延长小鼠存活时间：（4）与DMSO组比较，ConA/DMSO组血清TNF-α、IFN-γ和IL-12水平明显升高；与ConA/DMSO组比较，ATG预处理组血清TNF-α和IFN-γ水平在6h和12h明显降低，IL-12水平在2h、6h和12h均显著降低（P<0.05）；（5）与DMSO组比较，ConA/DMSO组肝组织中TNF-α、IFN-γ和促凋亡基因Bax mRNA表达水平升高，抗凋亡基因Bcl-2mRNA表达水平降低；与ConA/DMSO组比较，ATG预处理组肝组织中TNF-α、IFN-γ和Bax mRNA表达水平均降低，Bcl-2mRNA表达水平升高（P<0.05）；（6）与DMSO组比较，ConA/DMSO组肝细胞凋亡数目显著增多；与ConA/DMSO组比较，ATG预处理组肝细胞凋亡数目减少；（7）与ConA/DMSO组比较，ATG预处理组增强了肝脏和脾脏中MDSCs募集活化，影响了T细胞、NK细胞和NKT细胞的比例；（8）与ConA/DMSO组比较，ATG预处理组SOD活性在24h时升高（P<0.05）；MDA活性在2h、12h和24h均降低（P<0.05）；MPO活性在6h和12h均降低（P<0.01）。 结论：成功的构建了ConA诱导的小鼠急性肝损伤模型，证实了ATG对ConA诱导的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用，主要是通过抑制炎性因子的表达和释放，阻断肝细胞凋亡途径，促进MDSCs募集活化，抑制细胞膜脂质发生过氧化对小鼠急性肝损伤发挥保护作用。

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引言

材料和方法

1材料

1.1主要仪器和器械

1.2主要实验试剂

1.3主要试剂和液体的配制

1.4实验动物

2方法

2.1动物分组

2.2动物肝炎模型建立及样本采集

2.3血清ALT和AST检测

2.4苏木素-伊红（HE）染色

2.6 RT-PCR检测小鼠肝脏mRNA相对含量

2.7 酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清细胞因子表达水平

2.9 SOD、MDA和MPO检测

2.10 统计学分析

1牛蒡子苷元降低血清ALT和AST水平

2牛蒡子苷元减轻肝脏病理损伤

3牛蒡子苷元提高小鼠生存率

4牛蒡子苷元抑制炎性因子的表达

5牛蒡子苷元抑制ConA诱导的肝细胞凋亡

7 检测肝组织中SOD、MDA和MPO水平

讨 论

结 论

参考文献

综述

综述参考文献

攻读学位期间的研究成果

致谢