小白菊内酯对肝癌细胞侵袭及迁移的影响及相关机制的研究

摘要

目的:
　　 肝癌是我国常见的一种恶性肿瘤之一,肝癌的侵袭与迁移是影响患者预后的重要因素。近年来小白菊内酯(parthenolidc,PAR)作为转录因子NF-κB的有效抑制剂,其抗肿瘤作用得到认可。但国内外关于PAR对肝癌作用的研究还不深入。已有研究表明PAR具有抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡的作用。本文旨在探讨小白菊内酯对肝癌细胞侵袭与迁移的影响及相关机制。
　　 方法:
　　 1、MTT法检测PAR对肝癌细胞增殖抑制的影响
　　 培养人肝癌细胞株Bel-7402细胞株,加入96孔板,实验组加入不同浓度的PAR,对照组则加等量不含药物的培养液。PAR处理24h、48h后,MTT法检测各孔吸光度(OD)值,计算细胞增殖抑制率。
　　 2、Transwell小室检测PAR对肝癌细胞体外迁移的影响
　　 以不同浓度PAR处理细胞后,加入到transwell小室中,作用24h、48h后计数穿膜细胞数。
　　 3、被覆Matrigel胶的transwell小室检测PAR对肝癌细胞体外侵袭的影响
　　 以不同浓度PAR处理细胞后,加入到transwell小室中,小室上层被覆Matrigel胶,作用24h、48h后计数穿膜细胞数。
　　 4、Westernblot方法检测VEGF、MMP-9蛋白的表达
　　 收集PAR0μmol/L,20μmol/L,401μmol/L,60μmol/L,作用24h、48h后的细胞蛋白,用westernblot方法检测VEGF、MMP-9蛋白的表达。
　　 结果:
　　 1、PAR对肝癌细胞增殖抑制作用
　　 PAR在40μmol/L-100μmol/L浓度区间内以时间依赖方式抑制BeL-7402细胞增殖。PAR在5μmol/L-100μmol/L检测浓度范围内随着PAR浓度的增加,对BeL-7402细胞抑制率显著增加,呈量效关系(P＜0.05),PAR以浓度依赖的方式抑制BeL-7402细胞增殖。
　　 2、PAR对肝癌BeL7402细胞体外迁移的影响
　　 Transwell结果表明Bel-7402细胞正常对照组24h、48h后穿膜细胞数分别为121.33±9.61,169.00±5.57。经20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L的PAR处理24h后,穿膜细胞数逐渐减少,分别为105.00±9.85(p＜0.05),69.33±5.51(p＜0.05),49.67±8.62(p＜0.05)。经20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L的PAR处理48h后,穿膜细胞数逐渐减少,分别为94.33±8.02(p＜0.05),50.67±7.51(p＜0.05),24.67±4.04(p＜0.05)。结果表明PAR以浓度依赖方式抑制肝癌细胞体外迁移活性。PAR在40pmol/L-60μmol/L浓度区间内以时间依赖方式降低肝癌细胞体外迁移能力。
　　 3、PAR对肝癌BeL-7402细胞体外侵袭的影响
　　 Transwell结果表明Bel-7402细胞正常对照组24h、48h后穿膜细胞数分别为96.33±5.13,154.67±12.01。经20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L的PAR处理24h后,穿膜细胞数逐渐减少,分别为84.00±9.54(p＜0.05),53.67±4.1(p＜0.05),33.00±4.36(p＜0.05)。经20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L的PAR处理48h后,穿膜细胞数逐渐减少,分别为68.33±7.09(p＜0.05),44.00±6.25(p＜0.05),14.33±3.06(p＜0.05)。结果表明PAR以浓度依赖方式抑制肝癌细胞体外侵袭活性。PAR在60μmol/L浓度时,以时间依赖方式降低肝癌细胞体外侵袭能力。
　　 4、PAR对肝癌细胞VEGF及MMP-9蛋白表达的影响。
　　 对照组细胞经westernblot检测可见明显的VEGF、MMP-9蛋白表达,经20μmol/L,40μmol/L,60μmol/L的PAR作用24h、48h后,表达强度逐渐减低(P＜0.05)。结果表明PAR可同通过浓度及时间依赖方式抑制VEGF、MMP-9的表达,从而发挥对Bel-7402细胞抑制迁移与侵袭的作用。
　　 结论:
　　 1、小白菊内酯可以抑制肝癌细胞的增殖。
　　 2、小白菊内酯可以抑制肝癌细胞迁移与侵袭,其机制可能与下调肝癌细胞VEGF及MMP-9蛋白水平有关。