NF-κB p65反义寡核苷酸诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

摘要

目的：采用NF—кB p65 ASODN技术特异性阻断目的基因，探讨ASODN干扰前后胃癌细胞生长增殖及凋亡、细胞形态的变化，初步研究NF-кB p65下调对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响，探讨诱导凋亡可能的机制。 方法：人工合成NF-кB p65 ASODN，通过脂质体转染法转染人胃癌细胞系SGC-7901，实验分为对照组、Lip组、ASODN+Lip组和MSODN+Lip组，核苷酸浓度为10μM.20μM、40μM。分别在药物转染后24h、48h、72h收集细胞，采用MTT法测定NF-кB p65 ASODN对胃癌细胞增殖及凋亡的影响：流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡率及细胞周期；光镜观察药物作用后细胞形态学变化：通过免疫细胞化学技术检测NF-кB p65，Bel-2蛋白的表达。 结果：①MTT 法检测显示：不同浓度的NF-кB p65 ASODN 均可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖，呈时间-剂量依赖性；②流式细胞仪检测显示：NF-кBp65ASODN可诱导细胞凋亡，使细胞阻滞于G0/G1期，NF-кB p65 ASODN处理SGC7901细胞48 h后凋亡率为(50.51±3.35)％，错义寡核苷酸(MSODN)处理组为(20.34±2.11)％，两组相比，差异有显著性(P＜0.05)。③HE染色显示：NF-кBp65ASODN处理SGC-7901细胞48h后，光镜下可见细胞缩小变圆，核浓缩、核碎裂、边聚等。④免疫细胞化学结果显示：NF-кB p65 ASODN处理SGC-7901细胞48小时后，NF-кB p65蛋白及Bcl-2蛋白的表达水平较对照组显著下降(P＜0.05)。 结论：①NF-кBp65 ASODN与阳离子脂质体形成的复合物可以成功转染进入SGC-7901细胞内；②NF-кBp 65 ASODN在体外可以较明显的抑制SGC-7901细胞的增殖、诱导SGC-7901细胞凋亡，作用强度呈剂量-时间依赖性；③NF-кBp65 ASODN可以下调NF-кBp65，Bcl-2蛋白的表达；④NF-кBp65 ASODN诱导SGC-7901细胞凋亡的机制可能是其经脂质体转染入细胞后与细胞核及胞浆内NF-кB p65 mRNA特异性结合，抑制或封闭NF-кBp65 mRNA的表达，下调NF-кB p65蛋白及其下游产物Bcl-2等相关抑凋亡基因蛋白的表达，从而抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

第1章 引言

第2章 材料与方法

第3章 结果

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

附图

综述　核转录因子NF-κB与胃癌关系的研究进展

攻读学位期间的研究成果