香菇胞外多糖高产菌株筛选、发酵条件优化及抗氧化性抑菌作用的研究

摘要

香菇（Lentinula edodes）是一种深受人们喜爱的著名食药用菌，其口感鲜美，而且含有丰富的活性多糖，具有抑制肿瘤、抗氧化、抑菌和增强人体免疫力等多方面的生理活性。本研究从16个野生及4个栽培香菇菌株中分离、筛选出一株高产胞外多糖的菌株，对高产胞外多糖的发酵条件进行优化，并对其抗氧化性及其抑菌活性等方面进行了初步研究，旨在为香菇胞外多糖的抗氧化性和抑菌性研究提供思路和方法，同时也为香菇多糖作为抗氧化剂和抑菌成分的开发利用提供理论依据。主要研究结果和结论如下:
　　本研究对20个香菇菌株进行产胞外多糖量等指标比较，依据菌丝生长速度、菌丝致密度、液体摇瓶菌球的干重、密度、大小以及胞外多糖产量等生物学性状进行初步筛选。在此基础上，筛选出性状较优良菌株Le06、Le10、Le16和Le19。并对这4株菌株胞外多糖产量的稳定性进行分析比较。最终筛选出了具有菌球生物量大、胞外多糖产量高和产糖稳定的香菇菌株Le10，该菌株的生物量和产胞外多糖量达到0.98 mg/mL和0.78 mg/mL。
　　同时研究了不同发酵条件对香菇深层发酵的影响。结果表明在恒温25℃、初始pH5.5、接种量10％、250mL的摇瓶装液量100 mL的条件下培养，香菇深层发酵的菌丝体生物量及胞外多糖产量达到最大。同时考察了不同的碳、氮源及无机盐离子对香菇深层发酵的影响，选取葡萄糖、黄豆粉为适宜的碳、氮源，KH2PO4和MgSO4·7H2O为最佳无机盐离子。正交实验确定了香菇液体发酵的最佳培养基组成为:葡萄糖2％，黄豆粉2％，KH2PO40.1％，MgSO4·7H2O0.025％，按照上述分析得到的最佳培养基组合进行验证，结果得到菌丝体生物量为1.32 mg/mL，比优化前提高了34.69％;菌株胞外多糖产量为1.02 mg/mL，比优化前提高了30.77％。
　　采用抗DPPH自由基能力测试、对羟自由基清除作用以及对超氧阴离子自由基清除作用等3种方法对香菇胞外多糖抗氧化能力进行评价，香菇胞外多糖的浓度为0.30mg/mL时，其对DDPH自由基清除率达到67.42％，对羟自由基的清除率达到75.49％;香菇胞外多糖在浓度0.25mg/mL下，对羟自由基的清除率达到最大，为68.12％，试验结果显示香菇胞外多糖具有较好的抗氧化能力。此外，对香菇胞外多糖的抑菌活性及其抑菌稳定性进行了研究。结果表明，香菇胞外多糖在pH为5-9条件下，都具有抑菌活性，其中在pH为6时抑菌活性最强，说明该菌株具有较广的酸碱抑菌谱。同时该香菇胞外多糖具有良好的热稳定性，即使在121℃下处理30min仍具有较好的抑菌活性;这些良好的生化特性为香菇胞外多糖的进一步的应用奠定基础。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1 香菇的研究现状

1．1 香菇的生活史

1．2 食用菌液体发酵培养

2 香菇多糖的研究现状

2．1 香菇多糖的分布与来源

2．2 香菇多糖的生物学活性

2．3 食用菌多糖抗氧化作用

2．4 香菇多糖的抑菌活性

2．5 多糖分离提取的研究进展

3 本课题的立题意义

4 本课题的主要研究内容

第二章 香菇高产胞外多糖优良菌株的筛选

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

1．3 数据处理

2 结果与分析

2．1 菌丝生长性状的测定

2．2 摇瓶菌球生长情况的测定

2．3 胞外粗多糖含量的测定

2．4 菌株产胞外多糖的稳定性

3 讨论

4 本章小结

第三章 香菇高产胞外多糖菌株发酵条件的优化

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

2 结果与分析

2．1 培养条件优化

2．2 培养基成分的优化

3 讨论

4 本章小结

第四章 香菇多糖抗氧化性与抑菌特性的研究

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 实验方法

1．3 数据处理

2 结果与分析

2．1 清除DPPH·自由基能力

2．2 对羟自由基清除作用

2．3 对超氧阴离子自由基清除作用

2．4 抑菌圈直径的测量

2．5 香菇多糖的最小抑制浓度(MIC)

2．6 不同pH香菇多糖对6种指示菌抑菌率的影响

2．7 对温度的稳定性

3 讨论

4 本章小结

参考文献

全文结论

创新点

致谢