Ki-67甲基化寡核苷酸对肾细胞癌786-0细胞增殖及凋亡的影响

摘要

目的：体外检测Ki-67甲基化寡核苷酸对Ki-67基因表达的影响以及对肾细胞癌786-0细胞增殖及凋亡的影响。
　　 方法：用双荧光素酶报告基因检测Ki-67甲基化寡核苷酸对Ki-67基因启动子转录活性的影响；用RT-PCR和细胞免疫组织化学检测肾细胞癌786-0细胞中Ki-67基因的表达；用WST-8检测肾细胞癌786-0细胞增殖；用Annexin V-P1检测肾细胞癌786-0细胞凋亡；用Western Blot检测Bax和p53蛋白的表达。
　　 结果：1． Ki-67基因启动子转录活性检测结果：针对Ki-67基因核心启动子区(-223～+12)的5个甲基化寡核苷酸(MON1～MON5)对Ki-67启动子转录活性的抑制作用强弱依次为MON4＞MON5＞MON3＞MON2＞MON1;与对照组相比，Ki-67甲基化寡核苷酸可以显著抑制Ki-67启动子转录活性，并且存在剂量和时间依赖性；2． RT-PCR检测结果：Ki-67甲基化寡核苷酸组Ki-67 mRNA表达量显著降低，为空白组的61.04％，与对照组比较差异有统计学意义；3．细胞免疫组织化学检测结果：Ki-67甲基化寡核苷酸组Ki-67蛋白表达显著减少，为空白组的32.07％，而各对照组之间Ki-67蛋白表达没有显著差异：4．细胞增殖检测结果：于细胞转染后第24h、48h、72h和96h检测细胞的OD值，结果显示Ki-67甲基化寡核苷酸组肾细胞癌786-0细胞增殖率分别降至空白组的61.02％、73.78％、79.72％、91.25％，差异有统计学意义；5．细胞凋亡检测结果：分别于细胞转染24h和48h检测肾细胞癌786-0细胞早期凋亡和晚期凋亡，结果显示Ki-67甲基化寡核苷酸组早期凋亡和晚期凋亡细胞数目分别为空白组的2.42倍和2.57倍，差异有统计学意义；6.Western Blot检测结果：Ki-67甲基化寡核苷酸组Bax蛋白表达量比空白组增加了66.12％、p53蛋白表达量降至空白组的67.31％，差异有统计学意义。
　　 结论：Ki-67甲基化寡核苷酸可以抑制Ki-67启动子转录活性、抑制Ki-67基因表达，进而抑制肾细胞癌786-0细胞增殖，促进其凋亡。

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