小檗碱对人肾细胞癌细胞增殖、凋亡、DNA断裂及损伤修复的影响

摘要

小檗碱是一种异喹啉季生物碱（一种植物提取化合物），可以从多种中草药植物中萃取得到，如具芒小檗、黄连等，现已被应用为传统中医药。经研究发现，小檗碱具有多重药理作用，如抗氧化，抗肿瘤等，并且在治疗肥胖、阿尔兹海默症等疾病方面具有一定作用。近年来，随着科学研究的深入，小檗碱的抗肿瘤作用受到越来越多的重视。研究证实，小檗碱可以有效地抑制肝癌、骨肿瘤、食管癌等肿瘤细胞的生长，但是，小檗碱对于肾癌细胞的作用研究甚少，具有较大的研究价值。
　　众所周知，DNA是一种长链聚合物，能够携带生物遗传信息，因此，DNA在各种生物中具有举足轻重的作用，许多肿瘤药物可以通过各种不同的作用机制促使肿瘤细胞DNA断裂，从而发挥抗肿瘤的作用。然而，当DNA断裂后，肿瘤细胞会即刻启动DNA损伤修复机制，包括同源重组修复和非同源性末端链接等。因此，阻止癌细胞的DNA损伤修复是抑制肿瘤进展的重要方式。
　　目的:
　　探讨小檗碱(BBR)对人肾细胞癌(RCC)细胞生长、凋亡、DNA断裂以及DNA损伤修复机制的影响。
　　方法:
　　搜集关于BBR应用于治疗不同肿瘤的相关研究，并确定BBR对于肾癌是否具有明确的抑制作用的研究方向。采用CCK-8法测定BBR在0～240μmol/L浓度梯度下对RCC细胞(A498、786-O)增殖的影响;根据CCK-8检测结果，将肾癌细胞分为对照组(0μmol/L)、30μmol/L组和60μmol/L组，然后应用AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法及流式细胞术检测BBR对RCC细胞凋亡的影响;有效浓度的BBR处理RCC细胞后，通过蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡通路、DNA断裂和DNA损伤修复机制中相关蛋白(pro-caspase3、cleaved-caspase3、γH2A.X、Ku70)的表达情况。
　　结果:
　　1、用BBR处理RCC细胞A498和786-O后，肿瘤细胞增殖受到显著地抑制，并呈时间及药物浓度依赖性。
　　2、有效浓度的BBR可以明显增加A498和786-O细胞的凋亡率。
　　3、蛋白免疫印迹法证实，BBR可以促进A498和786-O细胞的凋亡。另外，BBR具有促进癌细胞DNA断裂的作用，并且，能够通过抑制Ku70蛋白的表达，明显地破坏A498和786-O细胞的DNA损伤修复机制，从而达到抑制RCC细胞进展的目的。实验结果表明，30、60μmol/L组与0μmol/L组相比，cleaved-caspase3的表达水平均明显增加，γH2A.X的表达水平均增加，而Ku70表达水平则均下降;60较30μmol/L组cleaved-caspase3表达增加，γH2A.X表达增加，而Ku70表达水平显著下调。
　　结论:
　　BBR可以遏制人RCC细胞的增殖，诱导RCC细胞的凋亡，并且能够促使A498和786-O细胞的DNA发生断裂，以及有效地抑制肾癌细胞的DNA损伤修复机制。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

一、实验材料与方法

二 结果

3 讨论

四 结论

五 附图表

参考文献

综述

致谢

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