玫瑰茄花色苷的纯化、鉴定、药理活性及稳定性研究

摘要

玫瑰茄(Hibiscus sabdariffa L.)属于锦葵科木槿属一年生草本植物或多年生灌木，素有“植物红宝石”之称。玫瑰茄富含多种人体所需的营养物质，其花瓣中富含的花色苷，是一种优质的天然色素来源。但目前对于玫瑰茄花色苷的研究存在花色苷纯度低、易吸潮、鉴定成分少和稳定性差等不足。为此，本文采用酸性甲醇提取花色苷，对其进行分离纯化及结构鉴定，并研究其药理活性和稳定性，为玫瑰茄花色苷的研究与应用提供基础。全文分为四个部分，主要研究内容如下：
　　第一部分玫瑰茄的成分分析
　　对玫瑰茄干花萼中的成分进行分析测定。结果表明，玫瑰茄干花萼中水分占8.99％，灰分4.48％，粗蛋白15.47％，粗脂肪2.62％。玫瑰茄花萼油脂中含17种脂肪酸，主要脂肪酸组成为肉豆蔻酸、棕榈油酸、棕榈酸、亚油酸、油酸、硬脂酸、(10E)-10-十九烯酸和花生酸，占总油脂含量的98.59％，其中不饱和脂肪酸达71.40％。玫瑰茄花萼中含Ca、K、Mg、Na、Zn、Fe、Mn、Cu等常微量元素，其中Ca含量最高，为917.62 mg/100 g。玫瑰茄干花萼中多酚、花色苷、黄酮和总糖含量分别为为752.27 mg GAC/100 g、8.45 mg/100 g、30.51 mgRu/100 g和9298.85 mg Glu/100 g。玫瑰茄富含多种营养物质，具有很好的研究和应用价值。
　　第二部分玫瑰茄花色苷的分离纯化及结构鉴定
　　采用C18 Sep-Pak柱对玫瑰茄花色苷粗提物进行纯化得到花色苷富集物。采用Sephadex LH-20对花色苷富集物进行纯化得到两个组分(组分1和组分2)，应用HPLC-ESI-MS/MS技术对该两个组分进行鉴定。结果表明，组分1中主要含有飞燕草色素-3-O-接骨木二糖苷、矢车菊色素-3-O-接骨木二糖苷，此外还含有芍药色素-3-O-接骨木二糖苷和少量飞燕草花色素衍生物；组分2中主要含有飞燕草色素-3-O-葡萄糖苷，此外还含有矢车菊色素-3-O-葡萄糖苷、芍药色素-3-O-木糖鼠李糖苷、飞燕草色素衍生物和少量酚类物质。首次在玫瑰茄中鉴定出芍药色素-3-O-接骨木二糖苷、飞燕草色素-3-O-葡萄糖苷和芍药色素-3-O－木糖鼠李糖苷。
　　第三部分玫瑰茄花色苷的药理活性研究
　　以清除DPPH自由基和ABTS自由基两种方法研究纯化后玫瑰茄花色苷提取物的抗氧化活性。以MTT法研究纯化后玫瑰茄花色苷提取物对HeLa细胞生长的影响。结果表明，花色苷富集物、组分1和组分2有强抗氧化活性，抗氧化活性强弱顺序为：组分1>组分2>花色苷富集物，其中组分1的抗氧化活性略低于Vc。花色苷富集物、组分1和组分2对HeLa细胞生长都具有剂量依赖性的抑制能力，抑制能力强弱依次为：组分1>组分2>花色苷富集物，其半数抑制浓度(IC50)分别为120.47μg/mL、139.49μg/mL和310.57μg/mL，该研究未见文献报道。
　　第四部分玫瑰茄花色苷β-环糊精包合物的稳定性研究
　　采用饱和水溶液法对玫瑰茄花色苷富集物进行β-CD包合，以吸光度和UV-Vis光谱为指标，比较花色苷富集物与花色苷包合物对光照、温度、金属离子和pH的稳定性。结果表明，与未包合的花色苷富集物相比，花色苷包合物对光和热的稳定性增强。可见玫瑰茄花色苷可以通过饱和水溶液法与β-CD包合来提高其对光和热的稳定性。

目录

文摘

英文文摘

第一章 绪论

1.1 花色苷的研究概况

1.1.1 花色苷的来源

1.1.2 花色苷的分类

1.1.3 花色苷的性质

1.1.4 花色苷的提取

1.1.5 花色苷的纯化

1.1.6 花色苷的药理活性

1.2 玫瑰茄的研究概况

1.2.1 玫瑰茄的营养成分和化学成分

1.2.2 玫瑰茄的药理活性

1.3 环糊精包合技术研究概况

1.3.1 医药中的应用

1.3.2 食品中的应用

1.4 课题研究目的与意义

1.5 课题研究的主要内容

第二章 玫瑰茄的成分分析

2.1 材料与仪器

2.1.1 材料与试剂

2.1.2 仪器

2.2 实验方法

2.2.1 样品预处理

2.2.2 水分含量测定

2.2.3 灰分含量测定

2.2.4 粗蛋白含量测定

2.2.5 粗脂肪含量测定

2.2.6 脂肪酸组成分析

2.2.7 微量元素测定

2.2.8 多酚、花色苷、黄酮和总糖的含量测定

2.2.9 数据分析

2.3 结果与讨论

2.3.1 基本成分分析

2.3.2 脂肪酸组成分析

2.3.3 微量元素的分析

2.3.4 总花色苷、总酚、总黄酮以及总糖含量

2.4 本章小结

第三章 玫瑰茄花色苷的分离纯化及结构鉴定

3.1 材料与仪器

3.1.1 材料与试剂

3.1.2 仪器

3.2 实验方法

3.2.1 玫瑰茄花色苷的提取

3.2.2 C18 Sep-Pak柱纯化花色苷

3.2.3 花色苷富集物表征

3.2.4 Sephadex LH-20纯化花色苷

3.2.5 HPLC-ESI-MS/MS分析

3.3 结果与讨论

3.3.1 UV-Vis分析

3.3.2 TLC分析

3.3.3 IR分析

3.3.4 Sephadex LH-20纯化

3.3.5 HPLC分析

3.3.6 HPLC-ESI-MS/MS分析

3.4 本章小结

第四章 玫瑰茄花色苷的药理活性研究

4.1 材料与仪器

4.1.1 材料与试剂

4.1.2 仪器

4.2 实验方法

4.2.1 样品的制备

4.2.2 玫瑰茄花色苷的含量测定

4.2.3 玫瑰茄花色苷抗氧化活性研究

4.2.4 玫瑰茄花色苷对HeLa细胞生长的抑制作用研究

4.2.5 数据分析

4.3 结果与讨论

4.3.1 玫瑰茄花色苷含量

4.3.2 玫瑰茄花色苷抗氧化活性

4.3.3 玫瑰茄花色苷对HeLa细胞生长的抑制能力

4.4 本章小结

第五章 玫瑰茄花色苷β-环糊精包合物的稳定性研究

5.1 材料与仪器

5.1.1 材料与试剂

5.1.2 仪器

5.2 实验方法

5.2.1 包合物的制备

5.2.2 包合物表征

5.2.3 包合物的稳定性研究

5.3 结果与讨论

5.3.1 包合物表征

5.3.2 包合物的稳定性研究

5.4 本章小结

第六章 结论与展望

6.1 主要结论

6.2 展望

参考文献

致谢

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