ADAM17通过TGF-β/Smad通路促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

摘要

胃癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一，其死亡率排在世界所有的恶性肿瘤的死亡率的第2位，对人类的身体健康造成严重的威胁。目前，胃癌的发生、病情的进展及其他组织器官的转移的机制还不是很明确，这在一定程度上限制了胃癌治疗领域的进一步发展。因此，探究胃癌的发病及转移的具体机制，并寻找对胃癌治疗和诊断有用的靶点已经成为研究胃癌的热门。
　　ADAMs家族即去整合素金属蛋白酶家族，是一类跨膜或分泌型蛋白，具有锌离子的依赖性，它们在人体的很多生物学过程中发挥作用。近些年的众多的科学研究显示，人类的一些常见肿瘤中的ADAM17的表达量呈现异常，而且ADAM17可以不同程度地影响这些肿瘤的发病和进展。
　　目的：检测胃癌细胞中的ADAM17的表达量的情况，明确ADAM17对胃癌细胞的生物学行为的影响，并探究其潜在的分子机制，这为ADAM17可以应用于胃癌的分子靶向治疗提供坚实的理论依据。
　　方法：1、采用荧光定量 PCR和 Western blot分别检测不同的人胃癌细胞系（MGC803、MKN45、HGC27、BGC823）中ADAM17的mRNA与蛋白表达水平；2、在HGC27和BGC823中转染pRK5M-ADAM17质粒，在MGC803和MKN45中转染sh-ADAM17质粒，并验证转染效率；3、应用 CCK-8和克隆形成实验评价上调及下调ADAM17后的胃癌细胞的增殖和克隆形成的能力；4、通过划痕实验和Transwell实验评价上调及下调 ADAM17后的胃癌细胞的迁移能力，通过侵袭实验评价其侵袭能力；5、通过Western blot验证ADAM17与胃癌细胞EMT进程中有关系的蛋白表达的关系，通过荧光定量PCR技术和Western blot法验证ADAM17与基质金属蛋白酶2（MMP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达水平的关系；6、通过Western blot法验证TGF-β/Smad信号通路中一些相关蛋白的表达情况。
　　结果：1、ADAM17在四种胃癌细胞中的表达量有差别，其中MGC803和MKN45中的ADAM17表达水平相对较高，HGC27和BGC823中的ADAM17表达水平相对较低；2、上调ADAM17表达后，可以促进胃癌细胞的增殖和克隆形成。下调ADAM17表达后，可以抑制胃癌细胞的增殖和克隆形成；3、上调ADAM17表达后，可以促进胃癌细胞的迁移和侵袭。下调ADAM17表达后，可以抑制胃癌细胞的迁移和侵袭；4、上调ADAM17表达后，MMP2及MMP9的表达量增加，下调ADAM17表达后，MMP2和MMP9表达量降低；5、上调ADAM17表达后，E-cadherin的表达水平下降，N-cadherin, vimentin和snail的表达水平升高，下调ADAM17表达后，E-cadherin的表达水平升高，N-cadherin, vimentin和snail的表达水平下降；6、上调ADAM17表达后, TGF-β/Smad信号转导通路中TGF-β、p-Smad2及p-Smad3表达水平升高，下调ADAM17表达后，TGF-β/Smad信号通路中TGF-β、p-Smad2及p-Smad3表达水平降低。
　　结论：1、ADAM17可以促进胃癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭；2、ADAM17可以通过TGF-β/Smad信号通路促进胃癌细胞的生物学行为及上皮间质转化的进程。

目录

声明

主要缩略词表

第一章 绪论

1.1 研究背景

1.2 本研究的目的、内容与技术路线

第二章 ADAM17对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

2.1 材料和方法

2.2 结果与分析

2.3 讨论

第三章ADAM17对胃癌细胞上皮间质转化的影响

3.1材料和方法

3.2 结果与分析

3.3 讨论

第四章 ADAM17通过TGF-β/Smad通路调节胃癌细胞的生物学行为和EMT

4.1 材料和方法

4.2 结果与分析

4.3 讨论

第五章 主要结论和展望

5.1 主要结论

5.2 工作展望

参考文献

综述: ADAM17在肿瘤中的研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的论文