抗仔猪腹泻蛋黄免疫球蛋白的制备及其研究

摘要

肠毒素性大肠杆菌(ETEC)是引起仔猪腹泻的主要病菌之一，现已分离鉴定的ETEC粘附因子有K88、K99、987P及F41等。本文将K88-K99-987P和K88-K99-F41分别与不同的佐剂(弗氏佐剂、白油佐剂、氢氧化铝乳胶和磷酸缓冲盐溶液)混合免疫产蛋鸡，研究抗仔猪腹泻蛋黄免疫球蛋白(IgY)的制备方法，对蛋黄中的IgY进行分离纯化，并对IgY的生物活性及其特性进行了系统的研究。 本文采用能使大肠埃希氏菌K88、K99、987P及F41菌株生产高单位纤毛抗原的Minca培养基，通过生长曲线的测定确定菌体最佳收集时间为12h。通过对蛋鸡免疫后卵黄抗体活性的监测，发现弗氏佐剂苗和白油苗可诱导机体产生持续、稳定的高活性抗体。 确定了水稀释法结合絮凝剂提取IgY的工艺路线，水溶性蛋白得率为84.47％。SDS-PAGE显示IgY的相对分子质量为188000左右，其轻链和重链的相对分子质量分别为28400和66500左右。采用水稀释→絮凝澄清→亲和层析纯化IgY，得率为17.92％；采用水稀释→絮凝澄清→硫酸铵沉淀→亲和层析纯化IgY，得率为16.43％。从一个鸡蛋黄中提取的IgY约占整个鸡蛋重量的1.22％。 用弗氏佐剂苗免疫产蛋鸡得到的IgY-K88-K99-987P和IgY-K88-K99-F41的活性比对照组的提高5个滴度；用白油佐剂苗免疫产蛋鸡得到的IgY-K88-K99-987P和IgY-K88-K99-F41的活性比对照组的提高4个滴度。 IgY的耐热实验表明：纯化的IgY和未纯化的IgY其活性在20℃～50℃之间差别不大；当温度继续升高时，未纯化的IgY的耐热性要比纯化的IgY的好。IgY的耐酸、碱实验表明：温度越高，IgY的耐酸、碱的能力越差，纯化的IgY在60℃时对pH的变化要比20℃和37℃时敏感。37℃时，当pH在2.0～4.0和8.0～10.0之间时，其变化对未纯化IgY活性的影响要比对纯化的IgY的活性影响显著。胃蛋白酶水解IgY的实验表明：IgY耐受蛋白酶水解的能力和pH有关。当pH在2.0和3.0时，胃蛋白酶对IgY的水解作用显著；当pH为4.0～6.0时，胃蛋白酶对IgY的水解作用不显著性。IgY体外抑菌实验表明：当IgY的添加量在1～10mg/mL之间时，能够抑制K88的生长繁殖，说明IgY可以和K88在体外结合。 体内动物实验表明：中、高剂量组复合蛋黄抗体粉对仔猪腹泻的治疗效果较好，治愈率达100％；低剂量组复合蛋黄抗体粉对仔猪腹泻的治疗效果较差，仔猪死亡率达50％；对照组仔猪死亡率达75％。如果在对仔猪攻毒前三天就开始给其灌服蛋黄抗体粉，可以对仔猪起到较好的保护作用，保护率达100％。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章绪论

第二章免疫佐剂的制备及产蛋鸡的免疫

第三章抗仔猪腹泻蛋黄免疫球蛋白的制备

第四章免疫球蛋白活性的测定及其特性研究

第五章复合蛋黄抗体粉对仔猪黄白痢防治效果的观察

结论与展望

参考文献

致谢

附录