樟芝发酵菌粉及其组分抗小鼠肝癌H作用的研究

摘要

樟芝是台湾省民间一种珍稀药用真菌，具有很好的抗肿瘤、保肝效果。由于樟芝子实体稀少，人工栽培困难，目前多采用液体发酵生产。本文对樟芝菌粉从营养价值、抗肿瘤效果方面，评价樟芝菌粉的开发价值，并对樟芝菌粉主要活性组分提取工艺、抗肿瘤药效进行初步研究。 本文首先对樟芝发酵菌粉和灵芝破壁孢子粉的化学成分进行较全面的对比分析，包括水分、灰分、脂肪、蛋白质、氨基酸、三萜、总酚、多糖、还原糖。结果表明樟芝菌粉含有丰富的粗蛋白(47.78％)、多糖(14.52％)、多酚(10.54％)、氨基酸(36.71％)、还原糖(4.81％)，高于灵芝破壁孢子粉的蛋白(18.12％)、多糖含量(0.81％)、多酚(0.41％)、氨基酸(6.089％)、还原糖(0.61％)的含量。灵芝破壁孢子粉粗脂(20.39％)，三萜(21.60％)高于樟芝发酵菌粉的粗脂(6.51％)，三萜(5.21％)。两者不饱和脂肪酸均是优势脂肪酸，以亚油酸，油酸为主。 对樟芝发酵菌粉的主要活性组分三萜类组分I、多糖类物质组分II提取工艺进行研究，得出三萜类提取的最佳工艺为在80％乙醇体系中浸提温度为80℃、浸提45min、料液比为1:30，其三萜平均提取率为2.60％。多糖类提取的工艺为在温度80℃，料液比1:30，提取时间2h，提取次数2次，多糖平均提取率为20.02％。 通过建立小鼠H22肝癌移植性肿瘤模型来考察樟芝菌粉及组分和灵芝破壁孢子粉的抑制肿瘤作用，包括抑瘤率、免疫指数、生存周期、肿瘤病理切片、bcl-2和bax蛋白的表达情况、测定荷瘤小鼠肝脏匀浆中的MDA、SOD、GSH—Px酶的活性等评价其抗肿瘤的药效。结果表明樟芝菌粉及其组分和灵芝破壁孢子粉各给药组均不同程度地抑制肿瘤生长，延长小鼠生存时间，降低bcl-2基因蛋白表达，提高bax基因蛋白表达，提高小鼠肝脏抗氧化酶活性，且均对免疫器官无毒性。其中樟芝菌粉多糖组分II抗肿瘤效果最好，樟芝菌粉的抗肿瘤效果可以与灵芝破壁孢子粉相媲美。

目录

文摘

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声明

第一章绪论

1.1中医药抗肿瘤研究

1.2中药活性成分抗肿瘤研究进展

1.3樟芝简介

1.3.1樟芝简介

1.3.2樟芝人工培养

1.3.3樟芝的活性物质

1.3.4樟芝的药理作用

1.4本课题研究的主要内容

第二章樟芝菌粉和灵芝破壁孢子粉成分分析对比

2.1引言

2.2实验材料与仪器

2.2.1实验材料

2.2.2实验仪器

2.3实验方法

2.3.1水分的测定

2.3.2总灰分的测定

2.3.3脂质的测定

2.3.4蛋白质的测定

2.3.5氨基酸含量及组成分析

2.3.6粗三萜含量的测定

2.3.7总酚含量的测定

2.3.8粗多糖含量的测定

2.3.9还原糖含量的测定

2.4结果与讨论

2.4.1一般成分含量对比

2.4.2主要活性组分含量对比

2.4.3氨基酸含量对比

2.4.4脂肪酸含量对比

2.5本章小结

第三章樟芝菌粉三萜类、多糖类物质的提取工艺研究

3.1引言

3.2三萜类物质的提取

3.2.1实验材料与仪器

3.2.2实验方法

3.2.3樟芝菌粉三萜提取工艺的优化结果

3.3多糖类物质的提取

3.3.1实验材料与仪器

3.3.2实验方法

3.3.3樟芝菌粉多糖提取工艺的优化结果

3.4本章小结

第四章樟芝菌粉及组分抗肝癌初步药效学研究

4.1引言

4.2材料与仪器

4.2.1实验材料

4.2.2实验仪器

4.3实验方法

4.3.1樟芝发酵菌粉主要活性组分的制备

4.3.2剂量的确定

4.3.3动物模型的建立

4.3.4给药模式

4.4疗效评价

4.4.1对肿瘤的抑制作用

4.4.2对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响

4.4.3对荷瘤小鼠的生存期作用实验

4.4.4对小鼠H22肝癌组织病理学的影响

4.4.5免疫组化法检测H22肿瘤组织中bcl-2和bax蛋白表达

4.3.6小鼠肝脏中的MDA、SOD、GSH-Px活力的测定

4.3.7统计分析

4.5结果与讨论

4.5.1对小鼠H22肝癌的作用

4.5.2对免疫器官脾指数、胸腺指数的影响

4.5.3对肝癌小鼠存活时间的影响

4.5.4对肿瘤组织病理形态学的影响

4.5.5对小鼠瘤组织中的bcl-2和bax蛋白表达的影响

4.5.6对小鼠肝脏抗氧化能力的影响

4.6本章小结

论文总结与展望

致谢

参考文献

附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文