牛奶中氯霉素残留检测技术的方法学研究

摘要

氯霉素(Chloramphnicol，CAP)属广谱抗生素，能抑制细菌蛋白质的形成，广泛用于动物各种传染性疾病的治疗，特别是用于奶牛乳腺炎的治疗，从而易使奶及奶制品中存在氯霉素残留。由于氯霉素存在严重的副作用，可引起再生障碍性贫血和粒状白细胞缺乏症等疾病，我国农业部已禁止使用该药，无论内销还是出口的畜产品，氯霉素残留都是必检项目。为保障我国人民的身体健康和国际贸易的需要，有必要建立灵敏度高、特异性强、简便易行、经济实用的方法，对市场上的牛奶等动物性产品进行监测管理。 本文建立了牛奶中氯霉素残留的微量分光光度法、荧光衍生化分光光度法、及柱前衍生化高效液相色谱法，并分别对三种方法进行了方法学评价，用高效液相色谱法考察了牛奶、鸡肉，虾仁等动物性食品中氯霉素的残留量。论文主要工作如下： 一、微量分光光度法测定牛奶中氯霉素含量的方法 在参考有关文献方法的基础上，利用还原偶氮反应建立了微量分光光度法定量牛奶中氯霉素残留的检测方法，考察了方法的最佳反应条件，并进行方法学评价。 以乙酸乙酯萃取牛奶中的氯霉素，将氯霉素的硝基基团在酸性条件下用氢还原，再加入亚硝酸钠生成重氮盐(过量亚硝酸加入氨基磺酸胺溶液除去)后，与N-1-萘乙二胺盐酸盐偶合，生成紫红色的偶合产物N-1-萘乙二胺氯霉素，在λmax=555nm波长下测定吸光度。吸光度(A)与氯霉素偶合产物浓度(μg·ml-1)在0.25～5μg·ml-1的浓度范围内呈线性关系(r2=0.9999)，线性方程A=0.1545C+0.0313。对牛奶中氯霉素的最低定量浓度为5ng·ml-1(ppb)，检出限为2.5ppb，氯霉素平均回收率为84.1％，平均RSD为6.6％。对阳性样品本方法的检测结果与高效液相紫外检测法测定结果一致。本方法仪器易普及、灵敏度较高、具有高选择性，可以在基层单位推广使用。 二、荧光衍生化光谱法测定牛奶中氯霉素含量的方法 氯霉素本身不发生荧光，但其苯环上的硝基基团在酸性条件下用氢还原可转化为芳香伯胺，能与荧光胺发生衍生化反应，形成具有荧光的物质，定量测定其荧光强度，可进一步提高方法的灵敏度，降低食品中氯霉素残留的检出限，以达到痕量检测的目的。 本文建立了荧光分光光度法测定牛奶中氯霉素残留量的方法，考察了荧光胺衍生化产物的荧光特征光谱，选择：λex=404nm，λem=508nm为测定波长，对衍生化反应的主要影响因素：缓冲液的pH值，荧光胺的用量，反应所需时间等采用正交实验设计法进行优选。结果表明，选择pH7.6的磷酸二氢钾-硼砂缓冲液1.35ml，荧光胺0.500ml，室温反应8分钟的条件下效果最佳。氯霉素荧光衍生产物浓度(ng·ml-1)与其荧光强度(F)在12.5ng·ml-1～500ng·ml-1之间呈线性关系，标准曲线方程F=0.1424C+1.4415(r2=0.9998)，方法测定牛奶中氯霉素残留的最低测定浓度为2.5ppb，检出限为0.9ppb，方法的平均回收率为85％，平均RSD为6.2％。 三、柱前衍生化-高效液相色谱荧光检测法测定动物性食品中氯霉素的残留量 在光谱法测定的实验基础上建立柱前荧光衍生化HPLC-Flu法测定牛奶、鸡肉、虾仁中的氯霉素残留，此法的灵敏度和选择性较HPLC-UV法均有较大提高。 实验重点考察了色谱条件，采用十八烷基键合硅胶为固定相，醋酸钠-醋酸缓冲液(0.02mol/l，pH6.0)-乙腈-四氢呋喃(76∶16∶8)为流动相，柱温40℃，荧光检测激发波长为410nm，发射波长为508nm。氯霉素标准品质量(m)与色谱峰面积在2ng～4000ng范围内呈线性关系，标准曲线方程为A=1199.5m+5363.6(r2=0.9999)，对样品的最低定量浓度为0.4ng·ml-1，方法的检出限为0.2ng·ml-1(以信噪比：S/N≥3计)。精密度较好，日内、日间平均RSD分别为5.0％、6.6％。牛奶样品氯霉素添加浓度为2.0ng·ml-1～40ng·ml-1时，方法的平均回收率为83.3％，平均RSD为7.5％。

目录

文摘

英文文摘

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本论文的创新之处

前言

第一章牛奶中残留氯霉素含量的微量分光光度法测定研究

第二章牛奶中氯霉素残留的荧光分光光度法测定研究

第三章柱前衍生化-高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素残留的检测技术研究

参考文献

结语

综述 动物性食品中氯霉素类抗生素残留检测方法的研究进展

致谢

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