生物活性分子共价包被心脏植入装置提高介入疗效的体外实验研究

摘要

目的：体外评价壳聚糖(Chi)、壳聚糖/纤维连接素(Chi/Fn)、壳聚糖/肝素(Chi/Hep)、壳聚糖/重组水蛭素(Chi/r-Hir)共价包被镍钛合金片的生物相容性。 方法：本研究分成血液相容性实验和细胞相容性实验两部分。实验分为血液对照组、未包被组、基础包被组(壳聚糖)、壳聚糖/纤维连接素(Fn)、壳聚糖/肝素(Hep)、壳聚糖/重组水蛭素(r-Hir)组；分别记为Control、Uncoating、Basiccoating、Chi/Fn、Chi/Hep、Chi/r-Hir其中按纤维连结素、肝素、重组水蛭素不同浓度分成低、中、高三个剂量组。血液相容性实验：将上述生物活性分子共价交联于实验用镍钛金属表面，通过血液溶血试验，观察红细胞细胞毒性；通过检测动态全人血接触试验后，各样本部分凝血活酶活化时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fg)、凝血酶时间(TT)、D-二聚体(DD)评价其抗血栓性能；扫描电子显微镜观察镍钛金属表面血小板吸附、聚集，纤维蛋白生成。细胞相容性实验：实验分成A、B两组，每组2片，将体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)种植于实验金属表面，体外孵育72小时，分别进行倒置显微镜观察镍钛金属细胞毒性；经纤维连结素、Ki67免疫荧光标记后，荧光显微镜观察细胞黏附、增殖情况，并进行荧光半定量分析。 结果：(1)血液相容性实验：实验各组红细胞、白细胞、血小板计数均在正常范围内且各组比较未见明显差异，各组溶血率均小于5％(1.6-1.7％)。Uncoating组、Chi组及Chi/Fn三组与Control组比较APTT、PT、TT值未见差异；Chi/Hep组和Chi/r-Hir组与Uncoating组、Chi组及Chi/Fn组相比，PT、APTT、TT均延长；其中Chi/r-Hir组与Chi/Hep相比，APTT、TT明显延长， PT无差异(各组方差均齐，LSD及SNK检验结果相同，P<0.005)，但不同浓度重组水蛭素组间TT、APTT表现明显差异(方差不齐采用Dunnetts法P<0.005)表明TT、APTT与重组水蛭素存在量效关系，随着水蛭素浓度增加抗凝效果愈明显，二者成正相关。但不同浓度肝素之间未见明显差异。扫描电镜结果显示Chi组表面血小板黏附、聚集同时伴有纤维蛋白生成。Chi/Fn组和Chi/Hep组表面伴有少量血小板黏附、纤维蛋白生成，Chi/r-Hir组则明显少于其它组。 (2)细胞相容性实验：经过72小时孵育，倒置显微镜一般观察见金属边缘细胞生长、移行良好，未及细胞变形；纤维连接素免疫荧光标记(胞浆红色)总体观察发现细胞在镍钛金属表面黏附分布不如在细胞培养板上良好。HUVECs黏附顺序如下：Chi/Fn组>Basiccoaltirng组>Uncoating组>Chi/r-Hir组>Chi/ttep组，各不同浓度组间未见明显差异；Ki67免疫荧光标记未包被组与基础包被组比较未见差异，排列顺序如下：Chi/Fn组>Basiccoating组=Uncoating组>Chi/r-Hir组>Chi/Hep组，不同浓度组间未见明显差异，且肝素组表现出抑制内皮细胞增殖活性。 结论：Chi/Fn促进内皮细胞黏附、增殖，但对凝血系统无影响；Chi/Hep、Chi/r-Hir包被均表现出良好抗血栓形成活性，Chi/Hep对人脐静脉内皮细胞有明显抑制作用，Chi/r-Hir与之比较更有利于内皮细胞黏附、增值。综上所述，我们认为Chi/r-Hir包被先天性心脏病介入封堵材料有利于内皮化，减少血栓形成。

目录

声明

一、缩略词表

二、论文摘要

1、中文摘要

2、英文摘要

三、正文

(一)前言

(二)材料与分组

实验一、生物活性分子共价包被镍钛合金片血液相容性的体外实验

实验二、生物活性分子共价包被镍钛合金片细胞相容性的体外试验

(五)结果

(六)、结论

(七)、讨论

(八)、参考文献

四、综述：

五、发表论文

六、致谢