菜籽蛋白酶水解及水解物的生物活性研究

摘要

目前国内外有关酶解菜籽蛋白开发活性肽的研究报道，大多使用单一酶，对于使用双酶组合水解菜籽蛋白及水解物的抗氧化活性的研究报道相对较少。本文以双低菜籽为原料，对菜籽蛋白用双酶组合进行水解，研究菜籽蛋白水解物的抗氧化活性，选出抗氧化活性较好的酶水解物进一步分离纯化，再确定抗氧化活性较高的菜籽多肽的分子量范围。此外，对不同水解度的菜籽多肽抑制血管紧张素转化酶（ACE）的活性也进行了研究，并与降压药卡托普利抑制ACE的活性进行相应比较，为开发具有抗氧化活性和降血压功能的菜籽蛋白水解物提供实验依据和理论基础。
　　 本文通过分别使用Alcalase单酶和Alcalase与Flavourzyme双酶结合相继水解菜籽蛋白，并对水解物的抗氧化活性进行研究，确定菜籽蛋白水解物清除DPPH自由基能力和还原能力与酶的种类和水解度有关，其中经双酶相继水解得到的水解物的还原能力和清除DPPH自由基的能力都大于单酶水解物，同时菜籽蛋白水解物的抗氧化能力还与其浓度有关，在一定浓度范围内提高蛋白水解物浓度可相应提高抗氧化能力。通过研究Na2SO3对中性蛋白酶、木瓜蛋白酶以及Flavourzyme水解菜籽蛋白的速率的影响，发现Na2SO3能明显提高中性蛋白酶的水解速率和水解度，且Na2SO3对其的影响明显大于对木瓜蛋白酶和Flavourzyme的影响，所以本文以中性蛋白酶水解菜籽蛋白，研究Na2SO3对其水解物的抗氧化性能的影响，包括对于水解物清除DPPH自由基活性、还原能力以及抑制亚油酸氧化活性的影响，确定使用Na2SO3对菜籽蛋白进行前处理，可增加中性蛋白酶对菜籽蛋白的水解速率，并能增强水解物清除DPPH自由基活性、但降低水解物还原能力和抑制亚油酸氧化活性。使用中性蛋白酶分别与Alcalase、Protamex、Flavourzyme、木瓜蛋白酶或胰蛋白酶相结合，用双酶相继水解菜籽粕，得到五组菜籽粕的双酶水解物，通过对相应水解物抗氧化活性的研究，确定所有水解物都具有一定清除DPPH自由基活性、还原能力和抑制亚油酸氧化活性，但以中性蛋白酶和胰蛋白酶组合的水解物的活性最强。
　　 根据上述实验结果，试验对中性蛋白酶和胰蛋白酶结合的水解物作进一步研究。经依次使用pellicon膜和Sephadex G-25凝胶柱分离后，得到四部分分子量不同的菜籽蛋白水解物，其中以分子量为6500Da－1050Da范围的水解物清除DPPH自由基的活性最高，表明菜籽粕双酶水解物的抗氧化活性取决于水解物的分子结构，即不仅与酶的种类有关，还与水解条件和水解度有关。使用碱性蛋白酶(Alcalase2.4L)水解菜籽蛋白，研究水解时间对水解物抑制ACE活性的影响，同时将水解物抑制ACE活性与商品降血压药物卡托普利进行比较。实验结果表明，相对于未水解菜籽蛋白，不同水解时间的菜籽蛋白水解物均有抑制ACE效果，但抑制效果并不随水解度的增大而增强。增加菜籽蛋白酶水解物的食用量有望达到商品降压药卡托普利抑制ACE的相似效果，显示其作为降血压产品的潜在应用前景。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 前 言

第二章 单酶和双酶制取菜籽蛋白抗氧化肽的初步研究

第三章 Na2SO3前处理对菜籽蛋白酶水解物抗氧化活性的影响

第四章 菜籽蛋白不同双酶组合水解物的抗氧化活性研究

第五章 菜籽蛋白双酶水解物的分离及抗氧化活性研究

第六章 酶法制取菜籽蛋白降血压肽

结 论

参考文献

攻读硕士学位期间研究成果

致 谢