色谱质谱联用技术在中药及内源性物质中的应用研究

摘要

色谱-质谱联用技术将色谱的分离能力与质谱的表征能力相结合，借助新的分析理论和技术，为中药现代化、生命科学和环境科学等学科分析问题的解决提供了强有力的工具和手段。本论文从实际问题出发，从色谱质谱联用仪器入手，目的是通过有效利用色谱-质谱联用分析技术提供的有用信息，分析比较了中药挥发油成分异同，同时建立了人血浆中内源性物质的定量分析方法。 本论文的研究内容主要为以下两个部分： 一、采用气相色谱-质谱联用技术分离和检测三种青皮与陈皮挥发油，用交替移动窗口因子分析法(AMWFA)同时完成共有组分重叠峰、包埋峰的分辨，借助直观推导式演进特征投影法实现了非共有组分的分辨，保留指数用来辅助定性。青皮和陈皮分别定性出61和59种物质，占挥发油总量的98.15-9.66％和97.6-99.84％。青皮和陈皮挥发油在物质的种类及各物质的含量都存在差异。D-柠檬烯是青皮和陈皮的特征物质，含量为65.61-83.14％。研究结果表明AMWFA大大提高了定性、定量结果的准确度，同时也为正确使用这两种中药提供了合理的可供参考的依据。 二、建立了一种简单、灵敏、快速分离和检测人血浆中L-精氨酸(L-ARG)，非对称二甲基精氨酸(ADMA)和对称二甲基精氨酸(SDMA)的高效液相色谱.电喷雾质谱联用法。用这种方法测定了21例健康人、21例2型糖尿病人(T2DM)及经血脂康治疗两年后的的ADMA含量。研究结果表明T2DM患者ADMA水平显著高于健康人，经血脂康治疗后与治疗前的T2DM病人的ADMA水平无显著差异。在此基础上，初步探讨了ADMA水平与2型糖尿病(T2DM)的相关性。主要研究了ADMA水平与空腹血糖(FBS)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)和甘油三脂(TG)的线性相关性。其中LDL与ADMA浓度具有很强的相关性，其相关系数达到0.448。首次发现T2DM患者ADMA水平与其临床指标LDL有着密切的联系，这有可能为诊断和治疗T2DM具有临床指导意义。FBS、HDL-C和TG与ADMA水平的相关系数分别为0.122、0.3lO和0.265，相关性不大，有待进一步研究。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

第一章绪论

1.1引言

1.2 GC-MS在中药挥发性成分研究中的应用

1.2.1中药挥发油

1.2.2 GC-MS在中药挥发油的成分分析中的应用

1.3液相色谱-质谱联用技术在内源性代谢物研究中的应用

1.4内源性代谢物非对称二甲基精氨酸

1.4.1非对称二甲基精氨酸(ADMA)的合成、代谢和生物效应

1.4.2 ADMA含量测定所面临的困难及解决方法

1.4.3 ADMA的分析方法

1.4.4不同分析方法需要的时间比较

1.4.5参考值

1.5化学计量学与色谱质谱联用

1.6本文研究内容

第二章三种青皮与陈皮挥发性成分比较研究

2.1引言

2.2理论

2.1.1交互移动窗口因子分析法(AMWFA)

2.1.2直观推导式演进特征投影法(HELP)

2.3实验部分

2.3.1样本来源

2.3.2仪器与试剂

2.3.3挥发油的提取

2.3.4测定条件

2.3.5保留指数

2.3.6数据处理

2.4结果与讨论

2.4.1挥发油成分的定性研究及色谱峰分辨

2.4.2挥发油成分的定量分析

2.5青皮与陈皮挥发油成分的比较分析

2.5.1青皮与陈皮挥发油成分分析

2.5.2青皮与陈皮挥发油成分的比较分析

2.6本章小节

第三章非对称二甲基精氨酸含量的测定及临床意义

3.1引 言

3.2实验部分

3.2.1受试者

3.2.2仪器与试剂

3.2.3衍生及提取人血浆中的L-ARG、ADMA和SDMA

3.2.4方法学考察

3.2.5色谱条件

3.2.6质谱条件

3.2.7统计分析

3.3方法学验证

3.3.1标准曲线和最小可定量浓度

3.3.2精密度

3.3.3稳定性

3.4讨论

3.4.1非衍生化方法

3.4.2衍生试剂的选择

3.4.3内标的选择

3.4.4色谱条件的优化

3.4.5血浆样品分析

3.5试验结果

3.6血浆ADMA水平与T2DM

3.7本章小结

结论与展望

参考文献

致谢

攻读学位期间主要的研究成果