三甲氧基二苯乙烯对小鼠巨噬细胞产生TNF-α及NF-κB活性的调控作用研究

摘要

目的：研究三甲氧基二苯乙烯(BTM)对小鼠巨噬细胞经脂多糖诱导后产生TNF-α及NF-κB活化的调控作用。 方法：RAW246.7小鼠巨噬细胞株培养长满单层后，消化收集细胞，调整细胞浓度为3×105/ml，接种于24孔板中，每孔加入细胞悬液1ml，同时各孔内放入无菌的盖玻片以制作细胞爬片，培养24小时后弃去培养基，各孔加入浓度分别为5、10、20、40、80μmol/L的BTM和白藜芦醇1ml/孔培养30min后，再加入10μg/ml的脂多糖(LPS)1ml/孔培养6小时，然后收集细胞上清液用L929细胞结晶紫染色法检测TNF-α的活性，用细胞毒百分率表示上清液所含TNF-α的活性，抑制百分率表示药物对巨噬细胞产生TNF-α的抑制程度。细胞爬片用免疫细胞化学法检测巨噬细胞中NF-kB的表达，用阳性细胞率表示NF-κB的活化程度。以加白藜芦醇的细胞作为药物对照组，以不加药物仅加LPS的细胞作为阴性对照组(LPS组)，以不加药物亦不加LPS的细胞作为正常对照组。 结果：1.①BTM和白藜芦醇本身对L929细胞无细胞毒性；②巨噬细胞经LPS刺激后其上清液的细胞毒百分率为62.27％；③经不同浓度BTM处理后巨噬细胞产生TNF-α的水平呈剂量依赖性减少，其上清液的细胞毒百分率分别为41.72％、32.82％、25.77％、13.50％、4.29％，与LPS组比较差别有统计学意义(P<0.01)，各处理组之间比较差别有统计学意义(P<0.05)；④经不同浓度白藜芦醇处理后巨噬细胞产生TNF-α的水平呈剂量依赖性减少，其上清液的细胞毒百分率分别为54.91％、50.00％、45.40％、33.74％、21.78％，与LPS组比较差别有统计学意义(P<0.01)，各处理组之间比较差别有统计学意义(P<0.05)；⑤BTM抑制巨噬细胞产生TNF-α的能力大于白藜芦醇，不同浓度下抑制百分率分别为33.00％VS11.82％、47.29％VS19.70％、58.62％VS27.09％、78.32％VS45.81％、93.11％VS65.02％，各组之间比较差别有统计学意义(P<0.01)。 2.①巨噬细胞经LPS刺激后NF-κB被活化，其表达NF-κB的阳性细胞率为98.55±1.36％；②经不同浓度BTM处理后，巨噬细胞表达NF-κB的阳性率呈剂量依赖性减少，分别为63.17±2.22％、53.28±1.60％、40.97±2.11％、27.06±2.22％、7.05±0.92％，与LPS组比较差别有统计学意义(P<0.01)，各处理组之间比较差别有统计学意义(P<0.01)；⑧经不同浓度白藜芦醇处理后，巨噬细胞表达NF-kB的阳性率呈剂量依赖性减少，分别为88.42±4.51％、77.37±2.03％、69.22±3.31％、56.21±1.41％、35.83±2.56％，与LPS组比较差别有统计学意义(P<0.01)，各处理组之间比较差别有统计学意义(P<0.01)：④BTM抑制巨噬细胞表达NF-kB的能力大于白藜芦醇，不同浓度下其抑制百分率分别为35.90％VS10.28％、45.94％VS21.94％、58.43％VS29.26％、72.54％VS42.96％、92.85％VS63.64％，各组之间比较差别有统计学意义(P<0.01)。 3.巨噬细胞经BTM和白藜芦醇处理后，其上清液中TNF-α的细胞毒百分率和其表达NF-kB的阳性细胞率均与药物浓度成负相关，而TNF-α的细胞毒百分率和NF-kB的阳性细胞率成正相关，相关性均有统计学意义(P<0.01)。 结论：1.BTM和白藜芦醇在浓度为5-80μmol/L范围内呈浓度依赖性地抑制巨噬细胞经LPS诱导的TNF-α的产生和NF-kB的活化。 2.BTM和白藜芦醇可通过抑制NF-kB的活化来抑制TNF-α的产生。 3.BTM抑制巨噬细胞产生TNF-α和NF-kB活化的能力大于白藜芦醇。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词

声明

前言

第一章材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3统计学处理

第二章结果

2.1 BTM和白藜芦醇对L929细胞的毒性检测

2.2 L929细胞结晶紫染色法检测TNF-α的活性

2.3免疫细胞化学法检测NF-κB的活性

2.4药物浓度、TNF-α活性及NF-κB活性之间的相关性分析

第三章讨论

3.1 TNF-α和NF-κB在免疫炎症反应发病机制中的作用

3.2 BTM和白藜芦醇对TNF-α和NF-κB的影响

3.3结语

第四章 结论

附图

参考文献

综述NF-κB在类风湿关节炎发病机制和治疗中的作用研究

致谢

在读期间成绩