水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物多残留检测的液相色谱-质谱法研究

摘要

本试验采用先进的同位素稀释法，抛弃传统使用的氧化柱，建立不同水产品基质中两种孔雀石绿、结晶紫及其代谢物液相色谱串联质谱检测方法，包括线性离子阱质谱法和三重四级杆质谱法。通过对线性试验、加标回收试验及实际样品检测结果分析，进行方法学参数考核。 采用Mcllvaine缓冲液和乙腈提取，碱性氧化铝和OASIS MCX SPE柱净化，洗脱液分别采用SRM模式(线性离子阱质谱法)及MRM模式(三重四级杆质谱法)检测。结果表明，在线性离子阱质谱法中，草鱼、鳗鱼、三文鱼、虾及贝的平均检出限(CCa；α 1％)在0.02μg/kg～0.0％μg/kg之间，平均定量限(CCβ；β5％)在0.04μg/kg～0.13μg/kg之间。在5个不同加标水平下草鱼、鳗鱼、三文鱼、虾及贝样中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物平均回收率在84.7％～112.1％之间，日间变异系数在1.4％～19.8％之间；在三重四级杆质谱法中，草鱼、鳗鱼、三文鱼、虾及贝的平均检出限(CCa,a 1％)在0.02μg/kg～0．07μg/kg之间，平均定量限(CCβ；β5％)在0.06μg/kg0.12μg/kg之间。在5个不同加标水平下草鱼、鳗鱼、三文鱼、虾及贝样中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物平均回收率在84.7％～112.1％之间，日间变异系数在1.5％～12.8％之间。为考察这四种药物的稳定性，在样品中按10μg/kg的浓度添加药物，不同条件取样提取后HPLC-MS/MS检测剩余药物的含量，计算其回收率。结果表明，室温条件下降解现象尤其明显，而在-20℃下则只有极少量的降解，并且无色代谢物更不稳定。提取过程中加入TMPD或抗坏血酸则会非常有效的减少这种降解过程。 通过对前处理条件及色谱质谱条件进行大量的优化，使方法的灵敏度、准确度和精密度得到了很大提高。这4种化合物均选用3个子离子进行定量和定性分析，完全满足欧盟2002/675/EC指令规定对于禁用药物的质谱确证方法需要4个确证分(IP)的要求(三个子离子3×1.5IP)。对不同实际鱼样进行检测，不仅能对待测物准确定量，而且能定性确证待测物，为疑似样品的鉴定提供技术保障。

目录

论文说明：缩略语表

声明

摘要

1前言

1.1抗菌机理及毒理研究

1.2代谢规律的研究

1.3残留检测方法研究

1.4研究内容及目的意义

2材料与方法

2.1药物与标准品

2.2主要仪器与试剂

2.2.1主要仪器

2.2.2主要试剂

2.3溶液配制

2.3.1标准溶液的配制

2.3.2提取溶液的配制

2.4样品定量分析方法学

2.4.1仪器条件

2.4.2样品提取

2.4.3样品净化

2.4.4最低检测限与定量限

2.4.5标准曲线和工作曲线

2.4.6准确度和精密度

2.4.7稳定性实验

3结果

3.1仪器方法优化

3.1.1 HPLC-LITMS/MS法

3.1.2 UPLC-QQQMS/MS法

3.2方法学结果

3.2.1 HPLC-LITMS-MS法

3.2.2 UPLC-QQQMS-MS法

3.2.3稳定性试验结果

3.3实际样品检测

4讨论

4.1离子源的选择

4.2色谱柱的选择

4.3样品前处理优化

4.3.1提取溶液的选择

4.3.2净化条件的优化

4.3.3固相萃取柱的选择

4.4待测物质的降解现象

5小结

文献综述 孔雀石绿的危险性评估

参考文献

致谢

附录