互叶白千层多糖的提取分离及抗氧化活性研究

摘要

本文对互叶白千层多糖提取工艺进行了研究，优化了互叶白千层多糖含量的测定条件，考察了影响互叶白千层多糖提取效率的主要因素，并根据单因素实验及响应面分析确定了提取互叶白千层多糖的最佳工艺条件。进一步采用凝胶柱层析法分离纯化了互叶白千层多糖，初步分析了互叶白千层多糖的结构与组成，考察了互叶白千层多糖体外抗氧化活性。
　　 1、采用蒽酮硫酸法测定互叶白千层多糖含量，最佳测定条件为:加入2g/L葸酮-硫酸溶液3mL，100℃反应5min后立即于冰水中冷却40min，以葡萄糖为标准在620nm比色测定。精密度实验RSD值为0.96％，平均加样回收率为87.8％，RSD值为4.75％。
　　 2、采用响应面法对超声辅助提取互叶白千层多糖工艺进行了优化。响应面分析结果显示超声功率、料液比、超声时间对互叶白千层多糖提取率的影响都达到了极显著水平，其影响按大小排序依次为超声功率＞料液比＞超声时间。通过SAS分析，提取互叶白千层多糖的最佳工艺条件为:超声时间21min，料液比40ml/g，超声功率170W。在优化条件下对实验结果进行验证，得到互叶白千层多糖提取率为6.194％，与预测值6.288％基本吻合，说明响应面分析法优化互叶白千层多糖提取工艺是可靠的。
　　 3、采用凝胶柱层析法对互叶白千层多糖进行了分离和纯化。Sephadex G-100法分析表明所得多糖MAP-2为单一多糖。红外光谱分析表明，多糖MAP-2有典型的多糖结构特征。通过HPLC分析，确定多糖MAP-2主要由果糖和半乳糖醛酸组成，其摩尔比为1.000∶1.614。
　　 4、采用羟自由基清除法、ABTS法和DPPH法三种方法研究互叶白千层多糖MAP-2的抗氧化活性。结果显示，MAP-2对羟自由基、ABTS+·和DPPH的半数抑制浓度(IC50)值分别为0.373mg/mL、0.092mg/mL和0.018mg/mL。说明互叶白千层多糖MAP-2具有较好清除·OH、ABTS+·、DPPH自由基的能力。
　　 本研究为今后互叶白千层多糖的深入研究与应用开发奠定了基础。

目录

声明

摘要

缩略语表

第一章 前言

1 互叶白千层的研究概述

1．1 互叶白千层简介

1．2 互叶白千层的分布现状

1．3 互叶白千层中的微量元素

1．4 互叶白千层的研究现状

2 植物多糖的研究概述

2．1 植物多糖的提取、分离纯化

2．2 植物多糖的纯度鉴定

2．3 植物多糖的相对分子量

2．4 植物多糖的结构分析

2．5 植物多糖的活性研究

3 本论文研究的主要内容

4 本论文研究的目的及意义

第二章 蒽酮-硫酸法测定互叶白千层叶中多糖含量

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 试剂及仪器

1．3 试验方法

2 结果与分析

2．1 最大吸收波长

2．2 显色剂浓度

2．3 显色剂用量

2．4 反应时间

2．5 显色稳定性

2．6 正交试验

2．7 精密度

2．8 加样回收率

2．9 互叶白千层多糖含量的测定

3 讨论

第三章 响应面法优化互叶白千层多糖超声提取工艺研究

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 试剂及仪器

1．3 实验方法

2 结果与分析

2．1 单因素试验

2．2 响应面试验

3 讨论

第四章 互叶白千层多糖的分离纯化及结构鉴定

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 试剂及仪器

1．3 试验方法

2 结果与讨论

2．1 DEAE-纤维素柱层析纯化互叶白千层多糖

2．2 Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析分离

2．3 纯度鉴定

2．4 红外光谱分析

2．5 单糖组成分析

3 讨论

第五章 互叶白千层多糖抗氧化功能研究

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 试剂及仪器

1．3 试验方法

2 结果与分析

2．1 互叶白千层多糖清除羟自由基的能力

2．2 互叶白千层多糖清除ABTS+·的能力

2．3 互叶白千层多糖清除DPPH自由基的能力

3 讨论

第六章 总结

1 结论

2 创新之处

参考文献

致谢

附录 攻读硕士期间成果记录