声明
摘要
1前言
1．1乳的生物学意义
1．1．1乳对于哺乳动物的生物学意义
1．1．2乳与人类的现代生活
1．2乳蛋白及其合成
1．2．1乳的分泌
1．2．2乳的生化组成
1．2．3乳中的蛋白质
1．2．4乳蛋白的合成
1．3促乳素对乳合成的调节作用
1．4乳腺上皮细胞的增殖调控
1．5乳蛋白合成相关信号通路
1．5．1 STAT信号通路
1．5．2 mTOR信号通路
1．5．3 JNK信号通路
1．6 Tudor-SN基因的功能
1．6．2 Tudor-SN的进化保守性
1．6．3 Tudor-SN的功能研究进展
1．6．4 Tudor SN下游调控
1．6．5 Tudor SN的上游调控
1．7实验的目的与意义
2材料与方法
2．1实验材料
2．1．1主要实验试剂
2．1．2主要实验仪器
2．1．3实验细胞
2．1．4实验所用试剂配制方法
2．1．5常用基本实验操作方法
2．2奶牛乳腺上皮细胞的纯度鉴定
2．3检测促乳素对Tudor-SN表达的影响
2．4 JNK对Tudor-SN的磷酸化影响
2．5 JNK对Tudor-SN调控乳腺上皮细胞增殖和乳蛋白合成的影响
2．5．2 JNK对Tudor-SN调控乳腺上皮细胞增殖的影响
2．5．3 JNK对Tudor-SN调控乳腺上皮细胞周期的影响
2．7 JNK对促乳素调控Tudor-SN入核的影响
2．8．2 WB检测T103A突变后Tudor-SN的入核能力变化
2．9 Tudor-SN与STAT5的相互作用
2．10．2免疫荧光检测Tudor-SN表达变化对STAT5影响
2．12．1 STAT5对促乳素调控乳腺上皮细胞乳蛋白合成的影响
2．12．2 STAT5对促乳素调控乳腺上皮细胞周期的影响
2．13数据分析
3结果与分析
3．1奶牛乳腺上皮细胞的培养与鉴定
3．2．2促乳素促进Tudor-SN入核
3．3促乳素对Tudor-SN的调控依赖于JNK
3．3．1抑制JNK后促乳素对Tudor-SN的磷酸化作用受到抑制
3．3．2激活JNK后促进促乳素对Tudor-SN的磷酸化作用
3．3．3 Tudor-SN与JNK的免疫共沉淀
3．4 Tudor-SN对细胞增殖和乳蛋白合成的调控依赖于JNK
3．4．2抑制JNK后Tudor-SN对乳腺上皮细胞的促增殖作用受到抑制
3．4．3抑制JNK后Tudor-SN对乳腺上皮细胞周期的促进作用受到抑制
3．4．4抑制JNK后Tudor-SN对乳腺上皮细胞乳蛋白合成的促进作用受到抑制
3．5 JNK影响促乳素对乳腺上皮细胞增殖和乳蛋白合成的调控
3．5．1抑制JNK后促乳素对乳腺上皮细胞的促增殖作用受到抑制
3．5．2抑制JNK后促乳素对乳腺上皮细胞周期的促进作用受到抑制
3．5．3抑制JNK后促乳素对乳腺上皮细胞乳蛋白合成的促进作用受到抑制
3．6 JNK调控促乳素诱导的Tudor-SN入核
3．7 T103A突变后Tudor-SN的入核能力受到抑制
3．7．2通过WB检测T103A突变后Tudor-SN的入核能力受到抑制
3．7．3通过免疫荧光检测T103A突变后Tudor-SN的入核能力受到抑制
3．8 Tudor-SN与STAT5的相互作用
3．8．1通过WB检测促乳素激活Tudor-SN与STAT5
3．8．2免疫荧光检测促乳素激活Tudor-SN与STAT5
3．9 Tudor-SN超表达激活STAT5
3．9．2免疫荧光检测Tudor-SN超表达后细胞核内STAT5水平增加
3．10干扰STAT5后Tudor-SN对细胞周期和乳蛋白合成的正调控作用受到抑制
3．10．2干扰STAT5后Tudor-SN对乳腺上皮细胞周期的促进作用受到抑制
3．11干扰STAT5后促乳素对细胞周期和乳蛋白合成的正调控作用受到抑制
3．11．1干扰STAT5后促乳素对乳腺上皮细胞乳蛋白合成的促进作用受到抑制
3．11．2干扰STAT5后促乳素对乳腺上皮细胞周期的促进作用受到抑制
4讨论
4．2．2促乳素通过JNK调控Tudor-SN并影响细胞增殖
4．2．3促乳素通过JNK调控Tudor-SN并影响乳蛋白合成
4．3 Tudor-SN通过STAT5调节细胞的增殖和乳蛋白合成
4．3．2 Tudor-SN通过STAT5调节乳腺上皮细胞的增殖和乳蛋白合成
4．4总结
5结论
致谢
参考文献
附录
攻读博士学位期间发表的学术论文
