Thalidomide对人结肠癌HCT-8细胞的生长及NF-κB、PPARγ表达的影响

摘要

目的:
　　1:观察Thalidomide及Thalidomide联合L-OHP对人结肠癌HCT-8细胞增殖和凋亡的影响;
　　2:观察Thalidomide对人结肠癌HCT-8细胞过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)、NF-κB蛋白表达的影响,探讨Thalidomide在结肠癌治疗上新的作用机制。
　　方法:
　　在37℃、5％CO2条件下培养人结肠癌HCT-8细胞。
　　1:MTT法检测不同药物分组对肿瘤细胞的增殖活性改变。Thalidomide组:溶剂对照组及不同浓度组(25、50、100、200、400μmol/L)、不同时间(24、48、72 h);L-OHP组(0、2.5、5.0、10.0、20.0μg/ml);联合用药组(Thalidomide100μmol/L,L-OHP5.0μg/ml,Thalidomide100μmol/L联合L-OHP5.0μg/ml),采用公式为:q=E(a+b)/(Ea+Eb-Ea×Eb),其中E(a+b)为联合处理组的抑制率,Ea、Eb分别为a药和b药单独处理的抑制率。若0.851.15为有协同作用,若q<0.85表示两药合用有拮抗作用。并计算两药联合效应。
　　2:流式细胞术(nowcytometry,FCM)检测细胞周期分布。周期检测分组:空白对照组,Thalidomide组(0、100、400μmol/L),以上实验重复3次,并分析以上各组之间的关系。
　　3:应用细胞免疫化学(immunocytochemistry,IC)方法SP法检测Thalidomide(0、100、400μmol/L)处理HCT-8细胞前后PPARγ、NF-κB蛋白表达。
　　结果:
　　1:MTT结果显示:随着Thalidomide浓度(25、50、100、200、400μmol/L)逐渐升高,Thalidomide对结肠癌HCT-8细胞的生长抑制率增高,表现为剂量.时间依赖关系,并以400μmol/L作用72h抑制率最高,不同Thalidomide浓度组抑制率分别于对照组比较,差异均有显著性(p<0.01),试验组之间两两比较,差异有显著性(p<0.01)。F时间=4111.113,F浓度=3103.643,FJ交互F=65.808,均p<0.01。L-OHP对结肠癌HCT-8细胞的生长抑制率亦呈剂量-时间依赖关系,100μmol/LThalidomide联合2.5、5.0、10.0、20.0L-OHPμg/ml联合用药有协同作用。
　　2:流式细胞术(FCM)显示Thalidomide阻滞细胞周期于G0/G1期,与溶剂对照组相比,随着Thalidomide浓度增加,细胞周期G0/G1期增多,S期逐渐减少,两者呈负相关(相关系数r=-0.998,p=0.045),各浓度组与对照组相比具有统计学意义(p<0.01),3:细胞免疫化学(immunocytochemistry,IC)显示:随着Thalidomide浓度的增大,PPARγ蛋白表达显著增加,NF-κB则明显降低两者具有相关性(相关系数r=-1.0 p=0.012)。
　　结论:
　　1:Thalidomide具有抑制结肠癌HCT-8细胞增殖及诱导其凋亡的作用;
　　2:Thalidomide能增强L-OHP对结肠癌HCT-8细胞的增殖抑制作用,两者具有协同作用;
　　3:Thalidomide阻滞结肠癌HCT-8细胞周期于GO/G1期;
　　4:Thalidomide可通过上调PPARγ,降低NF-κB蛋白的表达而发挥其抑制结肠癌HCT-8细胞增殖、诱导该细胞凋亡的作用,两者具有负相关性;
　　5:Thalidomide可能是一种PPARγ激动剂。

目录

中文摘要

ABSTRACT

论文部分 Thalidomide对人结肠癌HCT-8细胞的生长及NF-κB、PPARγ表达的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 Thalidomide抗恶性肿瘤的机制及应用

参考文献

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