黄芪多糖的分离纯化及体外抗氧化活性研究

摘要

目的：黄芪(Astrgalus membranaceus)是传统中药材，具有多种药理学活性，包括增强机体的免疫功能，增强心功能、降血压、降血糖、抗应激、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗氧化等多种药理活性。黄芪具有多种药效成分，其中黄芪多糖为黄芪主要的药效成分之一日益引起人们的关注。已有的文献表明，黄芪多糖能够有效的提高小鼠体内的GSH-PX活力，从而有效的抗氧化而延缓衰老。这提示我们黄芪多糖有可能具有多种抗氧化活性，但是目前对于黄芪多糖的体外抗氧化活性的研究并未有深入的研究报道。本实验论文以黄芪为原料分离纯化黄芪多糖级份，并对其体外抗氧化活性及机制进行初步研究，以期为黄芪多糖抗氧化的临床应用提供一定的理论基础。
　　 方法：黄芪经水煮醇沉，反复冻融，乙醇沉淀，常规干燥得黄芪粗多糖crudeAstrgalus membranaceus polysaccharides(cAMPS)。cAMPS经链霉菌蛋白酶酶解、Sevag法脱蛋白、DEAE-纤维素离子交换柱层析，Sephacryl S-200凝胶柱层析纯化得多糖级份AMPSA-a，AMPSA-b，AMPSA-c和AMPSB-d。采用DPPH氧自由基、邻苯三酚自氧化法和Fenton反应，评价黄芪多糖级份的抗氧化能力。
　　 结果：高效液相色谱(HPLC)分析，结果表明黄芪多糖级份AMPSA-a，AMPSA-b，AMPSA-c和AMPSB-d均为均一级份，其分子量分别为134.9，69.4，61.5和46.1kDa；气相色谱(GC)分析结果表明，不同多糖级份的单糖组成均有所不同，但各级分均主要由甘露糖(Man)、半乳糖(Gal)和葡萄糖(Glc)以不同的摩尔比构成。抗氧化活性检测显示，黄芪多糖级份都能够有效的清除DPPH、过氧阴离子和羟自由基，而且各级份的抗氧化活性具有浓度依赖性。在清除1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)自由基活性方面：当多糖浓度达到8mg/ml时，AMPSB-d，AMPSA-b，AMPSA-a和AMPSA-c对DPPH自由基的清除率分别达到87.2％，65.3％，58.6％和55.4％。在清除超氧阴离子活性方面：当浓度达到8mg/ml时，AMPSA-a，AMPSA-b，AMPSA-c和AMPSB-d的清除能力分别为32.4％，41.2％，42.3％和45.6％。在清除羟自由基活性方面：当浓度达到8mg/ml时，AMPSA-a，AMPSA-b，AMPSA-c和AMPSB-d的清除能力分别为32.4％，38.6％，35.1％和39.6％，各级份表现出较为接近的抗氧化能力。
　　 结论：
　　 1.本实验成功获得黄芪多糖AMPSA-a，AMPSA-b，AMPSA-c和AMPSB-d四个多糖级份。
　　 2.本实验获得的黄芪多糖具有显著的抗氧化功效，其中清除DPPH自由基的能力最强。