糖皮质激素对多发性硬化患者血清MMP-9、TIMP-1水平的调控作用

摘要

背景与目的：
　　 多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种以多发病灶及缓解复发的病程为临床特点的脱髓鞘疾病,近年来研究表明自身免疫可能是其主要的致病机制,血脑屏障的破坏、异常激活的T淋巴细胞通过血脑屏障进入中枢神经系统可能是MS发病的第一步;T淋巴细胞进入中枢神经系统需依赖多种因素,其中基质蛋白酶家族(matrix metalloproteinases,MMPs)发挥了关键作用,尤以MMP-9与血脑屏障的破坏、T淋巴细胞进入中枢神经系统关系密切,而金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)是近年来发现的MMP的天然抑制剂,是一组能抑制MMP活性的多功能因子,不同的TIMPs对MMPs家族成员无高度的选择性,但TIMP-1偏爱与MMP-9结合,TIMP-1与MMP-9的催化区以1:1的比例可逆性特异性结合,形成可溶性非共价复合物而发挥其抑制作用。本研究通过观察糖皮质激素治疗MS患者过程中血清MMP-9和TIMP-1水平的动态变化,探讨糖皮质激素治疗MS的作用机制,寻找治疗MS的新线索。
　　 资料与方法：
　　 糖皮质激素治疗MS组,系2009年9月-2011年10月郑州大学第一附属医院神经内科就诊的MS患者,追踪至缓解期;急性发作者48人,急性初期EDSS评分≥5分,其中男18人,女30人,年龄15岁～58岁,平均(35.5±13.0)岁,病程3月-9年,平均3.5年,缓解期45人,因其中2名在追踪过程中复发,1名缺失;急性发作者在入院次日起给予甲基强的松龙1000 mg/d静脉滴注治疗,每3天减半量,12天后改为口服治疗,直至4 mg/d服用3天后停用,并给予营养神经药物,疗程约4周。空白对照MS组,也系2009年9月-2011年10月郑州大学第一附属医院神经内科就诊的MS患者,追踪至缓解期;急性发作者22例,急性初期EDSS评分＜5分,其中男10人,女12人,年龄18岁～55岁,平均(31.2±14.0)岁,缓解期18人,因其中3名复发,1名缺失;急性发作者仅给予营养神经药物应用,无糖皮质激素应用。以上二组病例均符合McDonald诊断标准(2005),同时有郑州大学第一附属医院神经内科两名以上神经科医师通过病史及相关检查而诊断,均为实验室确诊或临床确诊病例,同时也排除其他多发性中枢神经系统病变的诊断。正常对照组是系性别、年龄与MS组相匹配的健康献血者50人,男20人,女30人,年龄19岁～50岁,平均(36.3±14.9)岁,均无肝肾肺部疾病、肿瘤、感染和自身免疫性疾病。所有受试者在首次检查前的3月内未用过糖皮质激素及免疫抑制剂,且排除其他自身免疫性疾病和感染性疾病。本研究所有受试者均被告知实验目的,同时征得受试者同意并在知情同意书上签字后进行。
　　 激素治疗组及空白对照组MS患者均在发病初期、1周、2周、4周及缓解期留取外周血并于急性初期与治疗结束时给予EDSS评分;对照组于入组时留取1次外周血。外周血置EDTA管中并迅速(30 min内)离心(2000转/分)10 min,吸取上清液,分装至0.5 mL EP管,置-80℃冰箱冻存,备用。严格按照MMP-9、TIMP-1ELISA试剂盒说明书对血清MMP-9、TIMP-1水平进行检测。采用SPSS17.0统计软件分析,对计量资料进行方差齐性和正态性检验,符合正态分布和方差齐性的计量资料以“均数±标准差”表示,多组间均数比较采用重复测量单因素方差分析,每组之间的两两比较采用LSD检验,两独立样本间比较采用t检验:采用非正态分布资料的Wilcoxon秩和检验,对两组患者的2次EDSS评分分值进行自身比较,并对两组患者治疗前、后的EDSS评分差值进行比较。检验水准均设为0.05。
　　 结果：
　　 1.MS急性期血清MMP-9水平高于缓解期和健康对照组,而TIMP-1水平降低(P均＜0.05),缓解期和健康对照组间差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 2.MMP-9在MS血清中呈先升后降的趋势。激素治疗组不同时间点血清MMP-9水平间比较差异有统计学意义(F=16.36,P＜0.01);与激素治疗前相比,治疗1周时MMP-9水平达到高峰(P＜0.01),2周时降至治疗前水平(P＞0.05),4周时较治疗前降低(P＜0.05);而空白对照组发病2周时MMP-9水平达高峰,且高于激素治疗组高峰(P＜0.05),发病4周时接近发病初期水平(P＞0.05)。两组患者发病初期、缓解期血清MMP-9水平差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 3.激素治疗组TIMP.1水平呈缓慢增高趋势,不同时间点间差异有统计学意义(F=4.27,P＜0.05),与激素治疗前相比,治疗4周时TIMP-1水平升高(P＜0.05);而空白对照组TIMP-1水平随病情波动变化不大。两组患者发病初期、缓解期血清TIMP-1水平差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 4.激素治疗组治疗后EDSS评分较治疗前减小(P＜0.05),且治疗前后EDSS评分差值大于空白对照组,差异有统计学意义,P＜0.05。
　　 结论：
　　 1.MMP-9在MS急性期血清中表达增强,TIMP-1表达降低;MMP-9、MMP-9/TIMP-1水平反应了MS疾病活动性,监测其水平具有一定的诊断价值。
　　 2.MMP-9在MS患者血清中呈先升后降趋势,糖皮质激素治疗可降低MMP-9上升的幅度,缩短升高的时间,降低其的表达,并诱导TIMP-1的表达,这是糖皮质激素可加速MS急性期临床症状的缓解、缩短急性期病程的机制之一。
　　 3.糖皮质激素对MS患者血清中MMP-9和TIMP-1均有影响,抑制了MMP-9的水平,提高了TIMP-1的表达,这可能是其治疗MS的主要机制之一。