Ezrin在人和小鼠肝癌组织中的表达及意义研究

摘要

目的：原发性肝细胞癌(肝癌，hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的十种恶性肿瘤之一，我国是肝癌的高发国家，肝癌死亡率居世界之首，死亡数占全球肝癌死亡人数的43.7％。近年来，肝癌发病年龄有提前的趋势，30～44岁组肝癌死亡居全部恶性肿瘤死亡的第1位。因此，肝癌的防治是现在乃至今后我国恶性肿瘤防治研究之重点。到目前为止，外科手术仍然是肝癌最主要的治疗手段。手术切除、复发再切除以及介入治疗等已成为较成熟的治疗模式。近年来，由于辅助治疗手段及外科技术的提高，肝癌的切除率已明显提高，但患者生存率仍然很不理想，其的5年存活率远低于1年存活率，其主要原因是肝癌的早期转移和术后复发。因此，关于肝癌的复发和转移研究己逐渐成为肝癌治疗研究领域的主要课题之一。 Ezrin是位于人类染色体6q25的基因Vi12的产物，作为小肠上皮刷状缘细胞骨架的主要成分，于20年前被Bretscher发现。近年来有研究表明ezrin在某些小儿肿瘤转移过程中起了重要作用。到目前为止，现在有越来越多的实验和临床证据表明，ezrin和细胞黏附分子是影响细胞黏附功能和肿瘤细胞恶性演进过程中的重要物质。研究发现许多肿瘤都表达ezrin，但是我们对其在肿瘤的发生、发展、转移及预后中所起的作用知之甚少。因此本研究旨在通过对ezrin在人类正常肝组织、肝硬化组织、肝癌组织及癌旁组织中的表达水平进行检测，及对小鼠实验性肝癌组织和肝硬化组织中ezrin的观察，了解它们的表达差异，寻找与肝癌发生发展、复发和转移相关的关键性调节因子及其治疗策略，改善肝癌患者生存率。方法： 本课题共分为两个部分： 第一部分：ezrin在人肝癌组织中的表达及意义 选择2005年1月～2007年8月于河北医科大学第三附属医院肝胆外科手术切除和中西医结合肝病科住院和门诊患者肝穿刺61例，其中肝癌30例，均经病理诊断为肝细胞癌。肝硬化患者23例，经病理诊断均有假小叶形成。正常肝组织8例，自良性肝脏疾病形态正常的肝脏组织。用免疫组织化学方法检测人肝脏组织中ezrin的表达情况。 第二部分：ezrin在小鼠肝癌中的表达及意义 选择昆明雄性小鼠75只，体重18～22克。随机分为3组，正常对照组15只，肝硬化组25只，用10％四氯化碳橄榄油灌胃，每只灌服0.2ml，每周四次，共16周，直到做病理显示假小叶形成。肝癌组35只，从传代昆明雄性小鼠腹腔抽取癌性腹水5ml，离心，应用下层较浓稠呈稀糊样的半液态物，调整肝癌细胞的浓度为10 6个/ml，将H22肝癌细胞株沿肝脏长轴与水平面成30度角注入0.02ml，于术后第7、14、20天开腹观察肝脏肿瘤并取肿瘤组织，用免疫组织化学方法检测小鼠肝脏组织中ezrin的表达情况。 结果： 1. 用免疫组织化学SP法对8例正常人肝组织、23例肝硬化组织、30例原发性肝癌及30例肝癌旁组织中ezrin的表达进行检测，结果显示：原发性肝癌组织中ezrin的阳性表达率为86.67％(26/30)，显著强于正常肝组织25％(2/8)和肝癌旁组织56.67％(17/30)及肝硬化组织43.48％(10/23)，HCC与癌旁组织、肝硬化组织、正常肝组织相比，Ezrin的阳性表达率差异有高度显著性(P<0.01)，各组织中ezrin的阳性表达率差异均有统计学意义。HCC组织呈低分化者ezrin强阳性表达率为50％，呈高、中分化者ezrin强阳性表达率分别为20％、14.28％，比较差异有显著性(X2=153.72～157.9，P<0.01)。HCC组织中肿瘤大于3cm组ezrin强阳性表达率为41.18％，肿瘤小于或等于3cm组，ezrin强阳性表达率为22.22％，二者比较差异有显著性(x2=144.60，P<0.01)。HCC组织中有转移的强阳性表达率为66.67％，无转移的强阳性表达率为16.06％，二者比较差异有显著性(x2=144.67，P<0.01)。 2. 用免疫组织化学SP法对14例正常小鼠肝组织、23例肝硬化组织、28例肝癌组织中ezrin的表达进行检测，结果显示：移植性肝癌组织中ezrin的阳性表达率为89.28％，显著强于正常肝组织(14.28％)及肝硬化组织(40％)，各组织中ezrin的强阳性表达率差异均有统计学意义(P<0.01)，造模第20天小鼠肝癌ezrin强阳性表达(80％)明显强于造模第7、14天小鼠肝癌ezrin强阳性表达(分别为33.33％和55.56％)，比较差异有显著性(x2=163.82～165.00，P<0.01)。 结论：ezrin的高表达与肝癌细胞的恶性演进有关。Ezrin具有维持细胞膜表面一些特殊结构的作用，通过控制细胞形态、参与细胞黏附作用、通过Rho GTP酶参与信号转导，同时参与AKt介导的细胞凋亡等机制，可能为肝癌的发生和发展提供了可能，但其中复杂的机制尚待进一步探索。

目录

声明

摘要

第一部分 Ezrin在人肝癌组织中的表达和意义

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分ezrin在小鼠肝癌组织中的表达和意义

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

综述一 Ezrin分子生物学特点及其与肝细胞肝癌关系的研究进展

综述二 肝癌移植动物模型的研究进展

致谢

个人简历