羊软骨Ⅱ型胶原蛋白的提纯及其对小鼠佐剂性关节炎作用的研究

摘要

本文主要分为Ⅱ型胶原蛋白(CollagenTypeⅡ，CⅡ)的提纯及其对佐剂性关节炎(AdjuvantArthritis，AA)作用的研究两部分。首先以羊肋软骨为原料，选用酶解法进行CⅡ的提纯；其次选用KM系小鼠作动物试验，研究口服CⅡ对AA的作用。 以羊软骨为原料，首先进行去除骨筋膜等的前处理，然后用盐酸胍抽提蛋白多糖，酸性条件下酶解，最后过夜盐析，离心所得絮状沉淀即为CⅡ。SDS-PAGE电泳结果表明：自提CⅡ样品与CⅡ标准品电泳结果带型一致。并且纯度测定结果为93.12﹪。 动物模型的建立方法采用类风湿性关节炎(RheumatoidArthritis，RA)动物模型中较为经典的完全弗氏佐剂(Freundscompleteadjuvant，CFA)诱导法。为确定最佳灌胃(IntragastricAdministration，ig)剂量进行了0.4ml、0.6ml、0.8ml三个剂量的预试验，结果表明：每只小鼠每天灌胃0.6ml/d自提CⅡ溶液为最佳剂量。试验动物选用体重、年龄相近的60只KM系小鼠，随机分为四组：正常(A组)、预防灌胃CⅡ组(B组)、治疗灌胃CⅡ组(C组)、模型组(D组)。各组每周测定体重一次，致炎后每隔两天测定双足足底厚度一次，于致炎后24天全部处死、采血、收集血清，测定部分血清指标和部分器官重量。 试验结果表明：(1)各组小鼠体重在试验全程中的变化趋势：A组变化幅度不明显；B组在致炎3d后呈缓慢增加趋势；C组开始变化不明显，致炎10d后体重呈明显增加趋势；D组呈现先降低后缓慢增加的变化趋势。说明致炎后严重抑制小鼠的体重增长；B组和C组对小鼠体重的恢复均有促进作用，并且前者效果更明显。(2)B组致炎12d后AA小鼠关节炎症程度明显降低，C组致炎14d后AA小鼠关节炎症程度降低；D组原发性炎症一侧(右足)一直处于炎症加重趋势；继发性炎症一侧(左足)开始一直加重，在致炎18d后有所减轻。(3)D组小鼠血清中IL-1值比A组显著升高(p＜0.01)，B组显著低于A组(p＜0.05)；C组与A组无显著差异(p＞0.05)；说明B组和C组均可以减轻炎症，且前者效果优于后者。(4)D组小鼠血清中NO浓度显著高于A组(p＜0.01)，而B组和C组均显著低于A组(p＜0.01)。(5)D组小鼠血清中SOD值较A组显著偏低(p＜0.01)，而MDA值显著升高(p＜0.05)；B组和C组SOD值明显高于A组(p＜0.01)。(6)比较各器官重，以肝脏重变化最为明显：A组显著低于B组(p＜0.01)；A组与C组无显著差异(p＞0.05)；B组显著高于其他三组(p＜0.01)；说明B组效果最好。

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文摘

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1引言

2材料和方法

3试验结果

4分析与讨论

5有待解决的问题

6结论

参考文献

在读期间发表的学术论文

作者简历

致谢